根除幽门螺杆菌对慢性胃炎和胃溃疡组织中MIF蛋白表达的影响Word格式.docx

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作者：

张双霞，李光迪，于晓辉，张方信【摘要】目的通过检测幽门螺杆菌（Hp）感染及根除治疗对慢性胃炎和胃溃疡组织中巨噬细胞移动抑制因子（MIF）蛋白表达的影响，探讨MIF和Hp在慢性胃炎和胃溃疡发生发展中的作用。

方法胃镜下随机采集胃黏膜活检组织，经14C呼气试验、Warthinstarry银染色法检测Hp均为阳性，并经病理检验证实为浅表性胃炎、萎缩性胃炎、胃溃疡各40例，Hp阴性的健康检查者25例，采用免疫组织化学SP方法分别检测各组MIF蛋白的表达；

进行Hp根治治疗2周，停药4周后复查Hp及MIF，比较根除前后各组MIF水平。

结果MIF蛋白在Hp阴性的正常胃黏膜中阳性表达低（2/25，8%）；

在Hp感染的慢性浅表性胃炎（12/40，30%）、萎缩性胃炎（26/40，65%）和胃溃疡组织（19/40，47.5%）阳性表达增强，显著高于Hp阴性的正常胃黏膜组（57/120vs.2/25；

χ2=13.376，P0.01）；

在慢性炎症中，随着炎症程度增加，MIF表达增强，差异有显著性（12/40vs.26/40；

χ2=9.825，P0.01）；

Hp根除后，MIF蛋白表达阳性率较治疗前显著降低（57/120vs.23/103；

χ2=15.264,P0.01），而Hp仍为阳性者MIF蛋白阳性率无显著变化。

结论Hp感染导致的胃黏膜慢性炎症及溃疡的形成与胃黏膜MIF的表达相关，根除Hp感染可降低胃黏膜MIF基因表达的异常，可能对预防或减缓胃癌的发生和发展具有重要意义。

【关键词】巨噬细胞移动抑制因子；

幽门螺杆菌；

慢性胃炎；

胃溃疡　　ABSTRACT:

ObjectiveToinvestigatetheeffectofHelicobacterpylori（Hp）infectiononmacrophagemigrationinhibitoryfactor（MIF）proteinexpressionandexploretheroleofHpandMIFinthedevelopmentofchronicgastritisandgastriculcer.MethodsThebiopsytissuesofgastricmucosawerecollectedundergastroscope,andHpwasdetectedby14CbreathtestandWarthinstarrymethod.Werecruited25healthypeoplewithnormalgastricmucosa,40patientspathologicallyconfirmedHppositivewithchronicsuperficialgastritis,40withatrophicgastritisand40withgastriculcer.MIFproteinexpressionwasexaminedbyimmunohistochemicalSPstainingmethod,thenHperadicationwasperformedonHpinfectedchronicsuperficialgastritis,atrophicgastritisandgastriculcerfor2weeks.HpandMIFwerereexamined4weeksafterdrugwithdrawal,anddifferenceinMIFexpressionwascomparedbetweenHpinfectedpatientsandHperadicatedpatients.ResultsTheexpressionofMIFwaslowinnormalgastricmucosawithoutHpinfection（2/25,8%）,butsignificantlyhigherinHpinfectedgastricmucosawithchronicsuperficialgastritis（12/40,30%）,atrophicgastritis（26/40,65%）andgastriculcer（19/40,47.5%）;

therewasasignificantdifferencebetweennormalgastricmucosawithoutHpinfectionandthatof　Hpinfectedpatients（57/120vs.2/25;

χ2=13.376,P0.01）.MIFexpressionincreasedwiththeseverityofinflammationinchronicgastritis,andtherewasasignificantdifferencebetweensuperficialgastritisandatrophicgastritis（12/40vs.26/40;

χ2=9.825,P0.01）.TheexpressionofMIFwasnoticeablydecreasedafterHperadicationcomparedwithbefore（57/120vs.23/103;

χ2=15.264,P0.01）;

however,therewasnosignificantchangeinthosepatientswhoseHpwasstillpositive.ConclusionTheexpressionofMIFongastricmucosaisassociatedwiththedevelopmentofchronicgastritisandgastritisulcercausedbyHpinfection.EradicationofHpcouldcutdowntheabnormallyhighMIFexpressioningastricmucosaandslowdowntheformationanddevelopmentofgastriccarcinoma.　　KEYWORDS:

macrophagemigrationinhibitoryfactor;

Helicobacterpylori;

chronicgastritis;

gastriculcer　　巨噬细胞移动抑制因子（macrophagemigrationinhibitoryfactor,MIF）是重要的炎症因子，能抑制巨噬细胞迁移，促进IV型过敏反应中巨噬细胞的聚积。

近年来，许多研究证明MIF参与细胞增殖和分化的调节，在多种炎症性疾病和恶性肿瘤细胞中高表达，在胃癌中的表达显著增高[12]，幽门螺杆菌（helicobacterpylori,Hp）是慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌和胃B细胞淋巴瘤重要的危险因子[3]。

为进一步探讨Hp和MIF在慢性胃炎胃溃疡向胃癌发生过程中的作用，我们检测了Hp感染的慢性浅表性胃炎、萎缩性胃炎和胃溃疡组织中MIF的表达，并给予Hp根除治疗，分析Hp根除前后MIF表达的变化，探讨MIF和Hp在慢性胃炎和胃溃疡发生发展过程中的可能作用及两者的相关性。

　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1临床资料　　连续收集胃镜下活检组织，由有经验的消化科医师在胃镜下取材，同时进行组织学检查，依据组织学检查结果收集浅表性胃炎、萎缩性胃炎和胃溃疡各40例，取健康成年人并经病理检查无炎症活动及Hp感染的正常胃黏膜25例。

其中男78例，女62例。

年龄19～72岁，平均年龄41岁。

所有受试者在检查前2周内未服用过质子泵抑制剂、铋剂及抗生素，无服用其他药物史，肝肾功能均正常。

慢性胃炎在炎症明显处和胃窦、胃体各取材1块，胃溃疡在其边缘和胃窦、胃体各取材1块，立即投入40g/L多聚甲醛中固定。

　　1.1.2Hp根治治疗　　方案为奥美拉唑20mg、阿莫西林1.0g、替硝唑1.0g，均每天2次，疗程7d。

停药4周后复查14C呼气试验，阴性者判定为Hp根除，并同时采集胃黏膜组织做MIF检测。

　　1.1.3试剂　　兔抗人MIF多克隆抗体购自美国SantaCruze公司，SP9001免疫组织化学染色试剂盒及DAB显色试剂盒购自广州中杉金桥，Warthinstarry银染色试剂为实验室自配。

　　1.2方法　　1.2.1免疫组织化学法　　PBS代替一抗做阴性对照，已经确诊的肺腺癌做阳性对照，将甲醛固定的组织经过常规脱水、浸蜡、包埋后切片，厚度为4μm，切片经常规脱蜡水化，高压抗原修复，加100mL/LH2O2以灭活内源性过氧化物酶，加封闭用正常山羊血清工作液，加一抗（浓度1∶400），于4℃冰箱中过夜，加生物素标记山羊抗兔IgG，加辣根酶标记链霉卵白素工作液，DAB显色剂显色，苏木素复染，MIF在细胞浆中表达，阳性呈棕黄色。

　　1.2.2结果判断　　参照AXIOTIS等[4]标准，由两位病理医生采用盲法（独立检测）在高倍镜（×

400）下读片。

每张切片随机观察10个不重复的视野（不足10个视野的，按实际观察到的视野计数），根据阳性细胞占同类细胞总数的百分率及细胞染色强度综合判定。

染色强度评分标准：

不着色为0分，浅粉色或黄色为1分，粉色或棕黄色为2分，红色或黄褐色为3分。

阳性细胞所占整张片比例评分标准：

阳性细胞数10%为0分，10%～40%为1分，41%～70%为2分，70%为3分。

两种评分相加，0～1分为（-），2分为弱阳性（＋），3～4分为阳性（），5～6分为强阳性（）。

≤2分的定为阴性，2分的定为阳性。

　　1.2.3Warthinstarry银染色法检测Hp　　切片经常规脱蜡至水，放入10g/LAgNO3水溶液，60℃避光浸染60min，完成染色后倾去浸银液，用双蒸水涮洗。

显影工作液配制后即刻（1min内）倒入装有切片的玻璃皿中，室温下避光染色2～4min，显影至切片组织呈棕褐色，立即弃去显影液，流水冲洗停止显影过程，切片常规脱水至透明，光学树脂封片，Hp在镜下可见在金黄色的组织背景中，呈清晰黑色短棒状或S状。

　　1.3统计学处理　　实验数据采用SPSS13.0统计软件包进行处理，各组间对照采用四格表资料的Pearson卡方检验，以P0.05为差异有统计学意义。

　　2结果　　2.1MIF表达与病理分型的关系　　MIF表达部位位于细胞浆，染成黄色或棕黄色，在25例Hp阴性的正常胃黏膜组织中有仅有2例MIF呈阳性表达，阳性表达率为8%；

在40例Hp感染的浅表性胃炎、萎缩性胃炎和胃溃疡黏膜组织中分别有12例、26例和19例阳性表达，阳性表达率分别为30%、65%和47.5%，幽门螺杆菌阳性病变组MIF表达显著高于阴性正常组，差异有显著性（2/25vs.57/120；

χ2=13.376,P0.01）；

在慢性胃炎中，萎缩性胃炎MIF表达显著高于浅表性胃炎（12/40vs.26/40；

χ2=9.825,P0.01），说明炎症程度加重，MIF表达增强，在胃溃疡组织中，除了胃黏膜上皮细胞外，大量浸润的炎性细胞中也高表达MIF（图1～图3、表1）。

表1胃