体内药物分析课程必做作业答案Word格式文档下载.docx

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化学物质、合并用药；

人体昼夜节律、营养和精神状态。

为什么要进行体内药物分析？

体内药物分析的主要任务是什么？

为开展临床药学和临床药理学研究服务，以指导临床安全、合理、有效用药和正确评价新药。

体内药分的主要任务：

分析方法学的研究、治疗药物监测、药代动力学研究、人群代谢分型研究、体内内源性物质的测定及其它方面（药物滥用、吸毒、兴奋剂检测、法医毒物分析等）的应用。

2

药物进入体内后一般需经历哪些物理、化学变化？

这些变化与药理作用的关系如何？

物理变化——系指药物与生物大分子如血浆蛋白的结合反应。

化学变化——系指药物的代谢反应，包括一相代谢（氧化、还原、水解反应）和二相代谢反应（各种结合反应）

由于药物的作用强度与血液中游离药物的浓度密切相关，同时药物经代谢后活性发生了变化，故药物的物理、化学变化与药理作用密切有关。

药物在体内的代谢反应有哪些类型？

3

常用生物样本有哪些？

如何采集、储存。

常用生物样本有：

血样（血浆、血清和全血）、尿样、唾液。

采集与储存：

血浆——全血加抗凝剂，离心，取上清液；

血清——全血离心，取上清液。

采血后必须尽快离心分离出血浆或血清，置－20℃以下冷冻保存。

尿样——收集服药后一定时间内尿样，记录体积，混合均匀后取一定量,测定尿中药物浓度，计算一定时间内尿中药物的累积量。

唾液——漱口15分钟后收集口内自然流出或经舌在口内搅动后流出的混合唾液，离心后取上清液。

样本采集后不能及时测定，可置4℃冷藏，若放置时间较长，则需-20℃～-80℃冷冻保存。

生物样品测定前为什么要除去蛋白质？

除去蛋白质的常用方法有哪些？

除蛋白质的意义：

使结合型药物释放出来，以测定总浓度。

得到较“干净”的提取液，减少乳化。

消除对测定的干扰。

常用去蛋白质方法：

蛋白质沉淀法——生成不溶性盐或盐析和脱水作用。

包括：

加酸类、重金属盐、中性盐和能与水混溶的有机溶剂等，如：

三氯乙酸、高氯酸、Cu2+、硫酸铵、甲醇、乙腈等。

组织酶消化法——蛋白水解酶，如胰蛋白酶、胃蛋白酶等。

影响液-液提取和液-固提取效率的因素分别有哪些？

影响液-液提取的因素有:

水相pH提取溶剂离子强度

影响液-固提取的主要因素有:

固定相洗脱液流速样品装载量

4

评价分析方法的效能指标包括哪些项目？

如何求算？

试述体内药物分析方法设定的一般步骤。

首先进行文献查阅，设计方案，然后通过实验加以验证。

一般实验步骤如下：

以纯品进行测定——选择最佳测定条件（线性，灵敏度、pH、检测波长等）。

空白样品测定——按设定的方法进行前处理和测定，考察空白值的大小和干扰程度。

以水代替空白样品，添加标准品后测定，以获得提取回收率的大致情况，从而对前处理中各步操作条件进行选择。

空白样品中添加标准后测定——求样品回收率，建立标准曲线等。

体内实样测定——根据实样测定结果来判断设定的方法是否合理、可行。

以上步骤需要反复试验以获得最佳实验条件。

阐述定量限与检测限的定义、区别及表示方法。

定量限——即定量下限（LLOQ），表示药物可定量测定的最低量，须符合一定精密度和准确度要求，常以标准曲线最低浓度点来确定，或以S/N=5～10确定。

检测限（LOD）——表示药物的最低可测度，不必定量，通常以信噪比（S/N）=2~3时被测药物的绝对量表示；

两者的区别主要在于是否有定量要求：

LOD没有定量要求，而LLOQ则有定量要求。

体内药物分析方法有哪些？

各有何优缺点？

体内药物分析方法可分为三大类：

光谱法——包括比色法、紫外法和荧光法。

方法优点是操作简便、快速，所需设备简单。

其缺点是不具备分离功能，选择性较差，对前处理要求高；

比色法和紫外法灵敏度较低。

免疫法——包括放射免疫、酶免疫、荧光免疫等。

方法优点是灵敏、专属，操作简便、快速，对样品预处理要求不高。

其缺点是精密度较差，需要试剂盒和专属仪器。

色谱分析法——包括HPLC,GC,LC/MS,GC/MS等。

方法优点是具有分离分析功能，是评价其它方法的参比方法。

5

紫外法消除干扰的方法有哪些？

说明原理和应用条件。

P82

1.差示分光光度法

（1）利用最大吸收波长进行测定

（2）利用最小吸收波长处的增色效应进行测定

（3）利用最大吸收与最小吸收之差（即振幅）进行测定

2.双波长测定法

如何进行激发光谱和荧光光谱的测定？

P91页

荧光物质吸收紫外光后被激发出荧光，如果将激发荧光的光源用单色器使其分光后，测定在每一波长的激发光照射下，物质所发射的荧光，以荧光强度对激光光波长作图，得到荧光物质的激光光谱，实际上，激发光谱就是荧光物质的吸收光谱。

激发光谱中最高峰的波长，能使荧光物质发出最强烈的荧光。

如果使激发光的波长和强度保持不变，而让物质所发生的荧光通过单色器色散，依次将不同波长的荧光照射于接收器上，并依次测其荧光强度，然后以荧光强度对相应的荧光波长作图，得到该物质的荧光发射光谱，简称荧光光谱。

6

免疫分析的基本原理、基本条件是什么？

基本原理：

即抗原-抗体结合反应。

在反应体系中，当抗体（Ab）量一定时，抗原（Ag）与标记抗原（Ag*）就与抗体发生竞争性结合反应，生成的[Ag*-Ab]与[Ag]的量呈负相关，这种特异的竞争性抑制的数量关系是免疫分析的定量基础。

基本条件是：

特异性抗体、标记抗原、未标记抗原（即标准品）。

常用免疫分析有哪几种？

相互间区别在哪些方面？

常用免疫分析有放射免疫法、酶免疫法、荧光免疫法、化学发光免疫法等，它们的主要区别在于标记物不同，由此采用的测定方法也不同。

在RIA中，结合物与游离标记物的分离方法有哪些？

7

气相色谱仪最常用检测器是什么？

有何特点？

适用范围？

GC法定量方法与内标选择原则？

对内标物的要求：

内标物必须是样品中不含有的组分，其保留时间应与待测物tR值相近，但R≥1.5，并具有足够的纯度。

内标物选择原则：

内标与被测物相差一个化学元素；

或内标与被测物为同系物；

或内标与被测物结构相似，或内标与被测物理化性质相似。

什么是正相色谱？

什么是反相色谱？

说明RP-HPLC法的常用固定相、流动相、适用范围，及流动相中甲醇等有机溶剂浓度变化对被测组分保留时间的影响。

常用固定相——ODS（C18）柱；

流动相——甲醇-水、乙腈-水、四氢呋喃-水；

适用范围——非极性至中等极性的各类分子型化合物；

流动相中甲醇等有机溶剂浓度增大，被测组分保留时间缩短。

HPLC仪常用检测器有哪些？

指出各种检测器的适用范围和适用注意点。

常用检测器有：

紫外、二极管阵列、荧光、蒸发光散射、电化学、质谱等。

紫外检测器——通用型检测器，适合具有紫外吸收的各种物质的检测。

二极管阵列检测器——具有光谱、色谱和三维图谱，可以进行定性和定量分析，以及色谱峰纯度检查。

荧光检测器——专属检测器，适合具有荧光或潜在荧光物质的检测，灵敏度高。

蒸发光散射检测器——适合于无紫外吸收物质的检测，要求流动相必须是挥发性的，不能含有非挥发性的缓冲盐。

电化学检测器——适合于具有氧化还原性质的物质，要求流动相必须有一定的电导率，一般为盐类、有机溶剂和水的混合物。

质谱检测器——具有定性定量功能和高的灵敏度。

8

什么是手性药物？

为什么要研究手性药物？

常用手性色谱方法有哪些？

分子结构中含有不对称碳原子（即手性中心）的药物称为手性药物。

因手性药物两对映体在体内的生物活性有差异，包括药效学差异（竞争拮抗等）和药动学差异（吸收、分布、代谢、排泄）。

为正确评价两对映体的作用和进行对映体药物的质量控制，所以要研究手性药物。

常用手性HPLC法有：

手性衍生化法、手性流动相添加剂法、手性固定相法。

9

毛细管电泳有哪几种分离模式？

毛细管电泳分离模式有毛细管区带电泳，胶束电动色谱，毛细管凝胶色谱，毛细管等电聚焦，毛细管等速电泳，移动界面毛细管电色谱。

10

常用联用技术有哪些？

常用联用技术有LC-MS，GC-MS，GC-GC，HPLC-HPLC，GC-HPLC，免疫分析-HPLC等

二、名词解释

TDM答：

治疗药物监测，为英文“therapeuticdrugmonitoring”的缩写。

一相代谢答：

指药物在体内发生的氧化反应、还原反应、水解反应。

二相代谢答：

指药物在体内的结合反应，包括：

葡萄糖醛酸结合、硫酸酯化、甲基化、乙酰基化、氨基酸缀合、谷胱甘肽缀合等。

生物转化答：

主要指体内代谢反应。

CYP1A2答：

细胞色素P4501族A亚族第2个酶基因。

血清答：

全血经离心后的上清液。

血浆答：

全血加抗凝剂（肝素等），经离心后的上清液。

RSD答：

相对标准偏差，即精密度的一种表示方法。

检测限答：

表示药物的最低可测度，不必定量，通常以S/N=2~3倍时被测药物的绝对量表示。

定量限答：

表示药物可定量测定的最低量，须符合一定精密度和准确度要求，常以标准曲线最低浓度点来确定，或以S/N=5～10确定。

提取回收率答：

指药物加入到生物样本中经前处理后测得的量与理论加入量的比值。

荧光光谱答：

以发射波长为横坐标，荧光强度为纵坐标所作的图。

激发光谱答：

以激发波长为横坐标，荧光强度为纵坐标所作的图

酶免疫分析答：

酶免疫分析是在放射免疫分析基础上发展起来的一种免疫分析方法，以酶代替同位素来标记药物，酶与底物、辅酶等反应后引起吸收光谱变化而被检测。

反相HPLC答：

即流动相极性大于固定相极性的HPLC。

ODS答：

即十八烷基硅烷键合硅胶，为常用反相HPLC的固定相。

三、填充题

体内药物分析的特点干扰杂质多，样品量少浓度低，不能再度获得完全相同的样品，B要有一定的仪器设备、工作量大等。

影响血药浓度的因素有机体因素（生理因素、遗传因素、病理因素）、药物因素（剂型、手性药物相互作用）、环境因素（药酶诱导剂、抑制剂、大气污染、饮食）等。

药物在体内发生的物理变化和化学变化分别是指和。

常用生物样品有血样（血浆、血清、全血），尿样，唾液等

常用去蛋白的方法有蛋白质沉淀法（加蛋白质沉淀剂，如：

三氯乙酸，高氯酸，Zn2+，Cu2+，硫酸铵，氯化钠，甲醇，乙腈，丙酮等）和组织酶消化法（加蛋白水解酶如：

胃蛋白酶，胰蛋白酶，枯草菌溶素等）

生物样品中药物与代谢