高考生物专题复习——PCR技术9PPT文件格式下载.pptx

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半保留复制；

【基础知识】,一、PCR原理：

需要提供合成模板；

不能起始新的DNA链，必须要有引物提供3-OH；

合成的方向都是53。

DNA聚合酶,【基础知识】,一、PCR原理：

DNA的热变性原理。

TaqDNA聚合,酶,耐高温。

【基础知识】,二、PCR条件：

胞内DNA复制与PCR技术的比较：

引物：

决定PCR扩增产物的特异性和长度。

引物设计的原则：

引物长度：

通常为2030bp，尽量降低引物与非扩增区的同源性；

引物内部不能存在部分互补序列；

两个引物之间不能存在部分互补序列；

引物的5端可以修饰，但3端不可以修饰：

如探针标记。

利用软件设计。

例题【20111年安徽】家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。

将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。

采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。

该PCR反应体系的主要成分应该包含：

扩增缓冲液（含Mg2+）、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、对干扰素基因特异的DNA引物对和TaqDNA聚合酶。

例题,【20121年江苏】请回答基因工程方面的有关问题：

（1）设计引物是PCR技术关键步骤之一。

某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。

第一组：

引物和引物局部发生碱基互补配对而失效；

第二组：

引物自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效。

（2）PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上。

温度：

9095：

变性；

5560：

复性；

7075：

延伸。

【注意】具体温度与DNA母链及引物中的G、C含量有关。

例题【20038年江苏】回答下列问题。

在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是耐高。

温PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。

表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。

请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？

引物对B。

【基础知识】,三、PCR过程：

预变性；

延伸；

循环。

DNA复制类似（如下图所示）。

图中引物中为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。

从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占比例为15/16。

在第三轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。

例题【24011年江苏】利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内,【拓展视野】,人教版选修3“利用PCR技术扩增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。

”，怎样理解？

基因工程的第四步“目的基因检测与鉴定”中的基因探针如何获取？

例题【20151年北京】根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。

如下图，从图中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取B、C作为引物进行扩增，得到的片段将用于获取该基因的全序列信息。

【拓展视野】,反向PCR：

【拓展视野】,不对称PCR：

用不等量的一对引物进行PCR扩增，产生大量特异长度的单链DNA。

制备基因探针。

【实验操作】,一、实验仪器：

【实验操作】,三、程序设计：

二、设置对照：

避免外源DNA的污染。

【实验操作】多聚酶链式反应扩增DNA片段,【实验操作】,四、操作提示：

微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌；

微量离心管在每吸取一种试剂都必须更换枪头；

所有的成分加入离心管后，盖严盖子，用手指轻轻弹击管的侧壁，离心10s，使反应液集中在离心管底部，再放入PCR仪中进行反应。

【实际应用】,一、遗传疾病的诊断：

基因诊断；

二、刑侦破案；

三、古生物学；

四、基因克隆：

五、DNA序列测定。

【结果分析】PCR检测电泳,