微生物遗传学的几个基本概念(精)PPT格式课件下载.ppt

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,在选择培养基（一般为基本培养基）上不生长,负选择标记,突变株不能通过选择平板直接获得,营养缺陷型的表示方法：

基因型：

所需营养物的前三个英文小写斜体字母表示：

hisC（组氨酸缺陷型，其中的大写字母C同一表型中不同基因的突变）,表型：

同上，但第一个字母大写，且不用斜体：

HisC,在具体使用时多用hisC-和hisC+，分别表示缺陷型和野生型。

（2）抗药性突变型（resistantmutant）,基因突变使菌株对某种或某几种药物，特别是抗生素，产生抗性。

特点：

正选择标记（突变株可直接从抗性平板上获得-在加有相应抗生素的平板上，只有抗性突变能生长。

所以很容易分离得到。

）,表示方法：

所抗药物的前三个小写斜体英文字母加上“r”表示strr和strs分别表示对链霉素的抗性和敏感性,（3）条件致死突变型（conditionallethalmutant）203,在某一条件下具有致死效应，而在另一条件下没有致死效应的突变型。

常用的条件致死突变是温度敏感突变，用ts（temperaturesensitive）表示，这类突变在高温下（如42）是致死的，但可以在低温（如25-30）下得到这种突变。

负选择标记,这类突变型常被用来分离生长繁殖必需的突变基因,（4）形态突变型（morphologicalmutant）,造成形态改变的突变型,特点：

非选择性突变突变株和野生型菌株均可生长，但可从形态特征上进行区分。

举例：

产蛋白酶缺陷突变株的筛选,菌落颜色变化,半乳糖苷酶基因的插入失活，使重组子菌落为白色而与兰色的非重组子分开。

形成芽孢缺陷菌株,（5）抗原突变型,指由于基因突变引起的细胞抗原结构发生的变异类型，包括细胞壁缺陷变异、荚膜或鞭毛成分变异等。

（6）产量突变型,通过基因突变而引起的目标代谢产物的产量发生变化的变异菌株，其在产量上高于或低于原始出发菌株。

如果产量提高的突变株，被称为“正突变”（plus-mutant），也称为“高产突变株”（highproducingmutant）；

如果产量低于出发菌株的突变株，则称为“负突变”（minus-mutant）。

2.按照突变所引起的遗传信息的改变情况可分为三种：

同义突变,表型不发生改变（密码子是简并的,如CGU变成CGC，但都编码精氨酸）；

错义突变,改变的密码子编码的氨基酸改变了；

无意义突变,终止密码子（UAA,UAG,UGA）,其它突变类型,毒力、生产某种代谢产物的发酵能力的变化等在实际应用中具有重要意义突变类型,一般都不具有很明显或可直接检测到的表型。

其突变株的获得往往需要较大的工作量。

第四节基因突变的机制,一、基因突变的分子基础,

（一）自发突变,

（二）诱发突变,引起自发突变的原因主要有以下几方面：

背景辐射和环境因素引起；

有害代谢产物引起；

互变异构效应引起的碱基配对错误；

DNA复制过程中碱基配对错误；

转座因子的作用。

通过人为的方法，利用物理、化学或生物因素显著提高自发突变频率的手段。

生物体在无人工干预下自然发生的低频率突变（10-6-10-9）。

它是生物进化的根源。

（二）、诱发突变,诱变剂（mutagen）：

凡能提高基因突变频率的因素统称为诱变剂,诱变剂的种类,物理诱变剂,化学诱变剂,生物诱变剂,碱基类似物诱变剂；

与碱基起化学反应的诱变剂；

嵌入诱变剂；

：

辐射和热,：

转座因子,

（1）碱基类似物-间接引起置换的诱变剂,它们在DNA复制中能掺入DNA分子中，由于其产生异构体的频率高，因此发生的错误配对可引起碱基的置换。

一类与正常碱基结构相似的物质，称为碱基类似物。

如：

5-BU,8-NG,2-AP等。

A-T,A-T,A-BU,A-T,G-BU,G-C,A-BU,加入5-BU,1.化学诱变剂,

（2）与碱基起化学反应的诱变剂-直接引起碱基置换,该类诱变剂与碱基起化学反应，改变碱基的结构，导致错配。

亚硝酸：

G-CA-T转换互变,各种烷化剂：

G-CA-T互变,羟胺：

只引起G-CA-T转换（专一性与C起反应）,亚硝酸：

对碱基的主要作用是氧化脱胺作用（使氨基变为酮基，改变配对性质，引起碱基转换）。

HNO2AH（次黄嘌呤）ATGCCUGCATGX（黄嘌呤）不引起突变,A-T,H-T,H-C,A-T,H-C,G-C,烷化剂,甲基磺酸乙酯（EMS）甲基磺酸甲酯（MMS）硫酸二乙酯（DES）N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（NTG）氮芥、硫芥环氧乙烷,NTG：

诱变作用强，称为超强诱变剂（突变率1%）；

能诱发邻近位置的基因同时发生突变，即所谓并发突变。

很多烷化剂除了能诱发点突变外，还能诱发染色体畸变。

由于染色体畸变常为辐射所诱发，所以这些物质又称为拟辐射物质。

烷化剂作用的主要机理是引起碱基上某些能形成氢键的集团发生烷基化。

烷化位点主要在鸟嘌呤的N7位和腺嘌呤的N3位上，烷化后的碱基也像碱基结构类似物一样能引起碱基配对的错误。

烷化剂的另一作用是使嘌呤整个地从DNA链上脱下来，产生一个缺口，在与缺口相对应的位点上就能配上任何一个碱基，从而引起转换或颠换。

（3）移码突变的诱变剂嵌入诱变剂,吖啶类染料（如原黄素，吖叮黄（橙），ICR类等）具有类似碱基对的扁平结构，能插入DNA分子的碱基对之间，使DNA结构变形，导致DNA在复制过程中的滑动，引起DNA链中插入或缺失一个或几个核苷酸，产生移码突变。

ICR：

一系列烷化剂和吖啶分子相结合的化合物,2.物理诱变剂及其诱变机制,紫外线，x-射线，射线，快中子，超声波等,

（1）紫外线（UV）,紫外线是实验室中常用的非电离辐射诱变因子，其作用机制主要是能引起：

DNA链的断裂、DNA分子双链的交联、嘧啶的水合作用相邻碱基形成嘧啶二聚体（TT，TC,CC）等。

其中最主要的效应是胸腺嘧啶二聚体的形成。

胸腺嘧啶二聚体通常出现在同一DNA单链上两个相邻的胸腺嘧啶之间，也可出现在两条DNA单链之间。

两种情况导致结果不同。

X射线、射线、快中子等属于电离辐射。

以X射线为例解释该类诱变剂诱变机理：

X射线的诱变作用有直接和间接两种方式：

（1）直接作用是引起DNA双链间氢键的断裂、DNA单链的断裂、不同DNA分子之间的交联等。

（2）间接作用是电离辐射能从水或有机分子中产生自由基，这些自由基作用于DNA分子，引起缺失和损伤。

自由基对嘧啶的作用更强烈。

此外，X射线还可能使细胞中形成一些碱基类似物，突变由这些碱基类似物所诱发。

与紫外线不同的是，电离辐射可通过玻璃和其他物质，穿透力强，能达到生殖细胞，因此常用于动植物的诱变育种。

（2）X射线、射线、快中子,短时间的热处理也可诱发突变，热的作用是使胞嘧啶脱氨基而成为尿嘧啶，从而通过碱基配对错误而引起GCAT的转换；

另外，热也可引起鸟嘌呤脱氧核糖键的移动，从而在DNA复制时出现包括两个鸟嘌呤的碱基对，在下一次的DNA复制中该碱基对错配就会引起GCCG的颠换。

（3）热,

（1）.转座因子（transposableelement）定义：

位于染色体或质粒上的一段能改变自身位置的DNA序列。

广泛分布于原核和真核细胞中。

又称“跳跃基因”,

（2）.转座因子的特点,1）在转座时，通过转座因子的复制，可将新形成的拷贝以非同源重组的方式转移到染色体的新部位上；

2）都携带有编码转座酶的基因，该酶具有转移位置的功能，是转座所必需的;

3）两端都有正向或反向末端重复序列。

3.生物诱变剂（转座因子）及其诱变机制,（3）根据分子结构和遗传性质，转座因子可分为3类：

插入序列（Insertionsequence,IS）,仅含有编码转座所必需的转座酶的基因，两端存在941bp的反向重复序列。

但其插入可干扰基因的正常读码序列，导致基因失活或引起突变。

转座子（Transposon,Tn）,除转座基因外，还有抗药性基因。

分为复合转座子和复杂转座子,Mu噬菌体,是以大肠杆菌为宿主的温和性噬菌体。

它在几方面不同于另一种温和噬菌体：

第一、MuDNA几乎可以插入到宿主染色体的任何一个位点上；

第二、DNA两端没有粘性末端；

第三、会引起宿主的被插入基因的基因突变。

（4）转座的过程：

插入突变（基因失活和极性作用）染色体畸变（染色体的缺失重复和倒位）,（5）转座的遗传学效应：

二、诱变及化学致癌物质的检测Ames试验,“生物化学统一性”法则：

人和细菌在DNA的结构及特性方面是一致的，能使微生物发生突变的诱变剂必然也会作用于人的DNA，使其发生突变，最后造成癌变或其他不良的后果。

Ames试验的依据,诱变剂的共性原则：

化学药剂对细菌的诱变率与其对动物的致癌性成正比。

回复突变（reversemutation或backmutation）：

突变体失去的野生型性状，可以通过第二次突变得到恢复，这种第二次突变称为回复突变。

美国加利福尼亚大学的BruceAmes教授于1966年发明，因此称为Ames试验,标准菌株要求：

检测鼠伤寒沙门氏菌（Salmonellatyphmurium）组氨酸营养缺陷型菌株（his-）的回复突变率（为了增加试验的敏感性，该菌株还应包括另外两个突变，一个是造成细胞表面透性增加的深度粗糙突变型，另一个是丧失切除修复能力的缺失型）。

Ames试验,斑点试验和平板掺入试验,方法步骤,1菌株鉴定用于测试的菌株，需经基因型和生物学性状鉴定，符合要求才能投入使用。

菌种：

TA97、TA98、TA100和TA102鉴定项目：

（1）脂多糖屏障丢失

（2）R因子（3）紫外线损伤修复缺陷（4）自发回变（5）回变特性诊断性试验,应用：

1斑点试验只局限于能在琼脂上扩散的化学物质，大多数多环芳烃和难溶于水的化学物质均不适宜用此法。

此法敏感性较差，主要