营养琼脂培养基配方及使用说明_精品文档Word文档格式.doc
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营养琼脂培养基用途:
营养琼脂培养基NA用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养,也可用于消毒效果测定(GB/T4789.28-2003中4.7,GB/T4789.2-2003,GB15979-2002和GB15981-1995,ISO标准)。
营养琼脂培养基检测原理:
蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;
氯化钠能维持均衡的渗透压;
琼脂是培养基的凝固剂。
营养琼脂培养基配方(每升):
蛋白胨10g
牛肉膏粉3g
氯化钠5g
琼脂15g
最终pH7.3±
0.2
培养基使用方法:
1、称取营养琼脂培养基NA33g,加入蒸馏水或去离子水1L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,121℃高压灭菌15min,备用。
2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL),放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠),充分振摇,即为1:
10的均匀稀释液。
依次做1:
100,1:
1000……稀释液。
3、根据对样品污染情况的估计,选择2—3个合适的稀释度,分别在做10倍稀释的同时,吸取1mL稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做2个平皿。
4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后,倒置于36±
1℃温箱中培养48±
2h。
5、观察结果。
6、菌落计数方法:
做平板菌落计数时,可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏,在计下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。