改良抗酸染色sop_精品文档文档格式.doc
《改良抗酸染色sop_精品文档文档格式.doc》由会员分享,可在线阅读,更多相关《改良抗酸染色sop_精品文档文档格式.doc(2页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
![改良抗酸染色sop_精品文档文档格式.doc](https://file1.bdocx.com/fileroot1/2022-10/14/17e26511-fd1a-49f8-876c-5968088a9e66/17e26511-fd1a-49f8-876c-5968088a9e661.gif)
尤其是细胞内抗酸杆菌的检出,有助于临床判定现症或潜伏感染。
3仪器
3.1器材
3.1.1FMU-6型细胞涂片离心仪
3.1.2FMU-6型细胞涂片沉淀器
3.1.3显微镜。
3.1.4载玻片
3.2试剂
3.2.10.3%TritonX-100萋纳石碳酸复红溶液
碱性复红乙醇饱和溶液10ml
5%石碳酸溶液90ml
TritonX-1000.3ml
3.2.2脱色剂
浓盐酸20ml
95%乙醇80ml
3.2.3复染液(吕弗勒美篮液)
美篮乙醇饱和溶液30ml
10%氢氧化钾0.1ml
蒸馏水100ml
3.2.40.3%TritonX-100(曲拉通)溶液
TtritonX-1003ml
蒸馏水1000ml
3.2.5APES(3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷)工作溶液
现用现配,用丙酮1:
50稀释。
3.2.6固定液(pH6.6)
丙酮45ml
甲醛25ml
磷酸氢二钠20mg
磷酸二氢钾100mg
蒸馏水30ml
3.2.70.1M磷酸盐缓冲液(PH7.4)
Na2HPO4·
12H2O26.46g
NaH2PO4·
2H2O2.664g
NaCl40g
KCl1.8g
蒸馏水900ml
4操作步骤
4.1载玻片处理
将酸碱处理后的载玻片浸泡于APES工作溶液30秒,取出冲洗,晾干,备用。
4.2标本收集
4.2.1将载玻片和滤纸插入FMU-6型细胞涂片沉淀器中,滤纸上的孔必须与FMU-6型细胞涂片沉淀器上
的孔对准,并旋紧FMU-6型细胞涂片沉淀器。
4.2.2在FMU-6型细胞涂片沉淀器的沉淀管中加入0.5ml脑脊液(若脑脊液呈浑浊或血性,应先根据情况稀释后再加入)。
4.2.3将FMU-6细胞涂片沉淀器放入FMU-6细胞涂片离心仪的挂钩上,盖上离心仪的盖子,离心3~5分钟。
待脑脊液中的有形成分完全沉淀到玻片上后,取下涂片固定。
4.3固定
将涂片浸泡于固定液中30秒,水洗,晾干。
4.4染色步骤
4.2.1固定后的涂片浸泡于0.3%TritonX-100溶液30分钟,0.1M磷酸盐缓冲液洗3次,晾干。
4.2.2初染涂片加0.3%TritonX-100萋纳石碳酸复红溶液,染5分钟,水洗。
4.2.3脱色脱色剂脱色约1分钟,轻轻摇动玻片,无红色脱落为止,水洗,晾干。
4.2.4复染复染液复染0.5~1分钟,水洗。
自然干燥后镜检。
5结果判断
抗酸杆菌呈红色,非抗酸杆菌呈蓝色。
6质控
6.1质控菌株及质控频率利用铜绿假单胞菌ATCC27853、结核杆菌ATCCH37RV做阴阳性质控对照,每日及更换染液批号时质控。
6.2质控方法参照麦氏比浊仪或麦氏比浊管,将标准菌株配制菌液3MCF浓度单位,高压灭菌后储存
冰箱备用。
或将高压后的菌液制成均匀的图片,放置室温备用。
7注意事项
7.1凡需进行抗酸染色的标本,每份标本只允许单独涂在一张载玻片上,不得将两份或两份以上的标本涂在同一张载玻片上,以免染色过程中因冲洗菌体脱落,致阴阳性结果混淆。
7.2抗酸染色切勿使用染色缸,以免着色的抗酸菌可能自涂膜上脱落而浮游于染色液或脱液缸中,连续使用造成假阳性的出现。
染色后印干用的滤纸,不得重复使用。
7.3脱色时间需根据涂片薄厚而定,厚涂片可适当延长,以几乎无红色为度。
8临床意义
针对结核病、麻风病的细菌检查,初步诊断。
奴卡菌可呈弱抗酸性,有利于鉴定细菌。
9安全防护措施
9.1为了防止交叉感染,标本应先高压灭菌后再涂片染色,气管刷片标本,应在紫外线灯下照射30分钟进行染色镜检。
9.2镜检后的玻片均浸泡在含有有效氯1000mg/L的消毒液。
10参考文献
10.1周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海.上海科学技术出版社,2007
10.2叶应妩,王毓三,申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京.东南大学出版社,2006
10.3张秀珍,朱德妹主编.临床微生物检验问与答.北京.人民卫生出版社,2008年7月.
11支持文件
微生物室室内质量控制管理程序
12记录表格
抗酸染液质控记录表
2011年3月1日发布2011年4月1日实施