基因工程习题及问题详解Word格式.docx

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A.37℃B.30℃C.25℃D.16℃E.33℃

4.下列关于限制酶的叙述错误的是（B）

A.I类限制酶反应需要Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。

B.II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。

C.III类限制酶反应需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。

D.I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性，II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。

E.II类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。

5.如果一个限制酶识别长度为6bp,则其在DNA上识别6bp的切割概率为（D）

A.1/44B.1/66C.1/64D.1/46E.1/106

6.多数II类限制酶反应最适PH是（C）

A.PH:

2-4B.PH:

4-6C.PH:

6-8D.PH:

8-10E.PH:

4-10

7.下列关于限制酶反应的说法错误的是（D）

A.限制酶识别序列或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。

B.许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。

C.有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。

D.限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。

E.BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。

8.II类限制酶反应中必须的阳离子是（C）

A.Na+B.Ca2+C.Mg2+D.Zn2+E.Mn2+

9.RFLP形成的原因是（A）

A.由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。

B.使用不同的限制性切酶进行切割。

C.杂交时使用不同的探针。

D.每种染色体存在两条。

E.提取不同的染色体DNA酶切。

10.下列关于限制酶命名的表示方法，正确的是（E）

A.Sau.3AIB.B.amHIC.pstID.EcorIE.HindIII

11.需进行DNA部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（D）

A.反应时间B.反应体积C.PHD.限制酶量E.反应温度

12.下列酶在反应中不需要ATP的是（D）

A.EcoKB.T4DNA连接酶C.BamHID.EcoBE.DNApolI

13.限制性切酶可特异性识别（B）

A.双链DNA的特定碱基对B.双链DNA的特定碱基序列

C.单链RNA的特定碱基序列D.单链DNA的特定碱基序列

E双链RNA的特定碱基对

14.下列与RFLP相关的一条是（D）

A.不同限制酶在单个染色体DNA上的限制性图谱。

B.两种物种个体间的限制性图谱。

C.同一个体等位基因的限制性图谱。

D.同一物种不同个体的限制性图谱。

E.非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。

15．限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（A）

A.识别和切割序列发生变化。

B.切割活性大大提高。

C.识别和切割序列与原来完全不同。

D.可以任意切割DNA。

E.只能部分切割DNA。

二、多选题

1.下列因素中影响限制酶切割的有（A,B,C,D,E）

A.EDTA浓度B.甘油浓度C.DNA纯度D.酶的自身活性E.盐浓度

2.限制酶反应中出现星活性的可能原因是（ABDE）

A．酶浓度太高B低盐C盐浓度过高D高PHE甘油浓度>

5%（V/V）

3．限制酶切割后的DNA电泳得到的电泳条带有些扩散，可能原因是（B，C，D，E）

A．酶失活B有蛋白质与DNA结合C酶切条件不合适

D有外切核酸酶污染E星号活性

4．下列有关回文序列的描述正确的是（A，B，C）

A．是II类限制酶的识别序列B是某些蛋白的识别序列C是基因的旁侧序列D是高度重复序列E是卫星序列

5．下列有关回文序列的一般特征正确的是（B，C，D，E）

A．可增强基因表达B有对称轴C是自我互补的序列

D．两条链从5‘3‘方向的序列一致E是II类限制酶的识别序列

6．关于II类限制酶说确的是（B，D）

A．具切核酸酶和甲基化酶活性

B．仅有切核酸酶活性

C．只识别非甲基化的DNA序列

D．II类限制酶反应条件只需要Mg2+

E．II类限制酶反应需要Mg2+,ATP

7．通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为（B，C）

A．限制酶只切割两个变异等位基因中的一个

B．限制酶位点可作为遗传标记

C．它不依赖变异的等位基因的产物的功能

D．不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异

E．同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同

8.下列关于II类限制酶的叙述正确的是（B，C，D，E）

A．它既有切酶的活性，也有外切酶活性

B．在特异位点对DNA进行切割

C．同一限制酶切割双链DNA时产生相同的末端序列

D．有些限制酶切割双链DNA产生粘末端

E．有些限制酶切割双链DNA产生平末端

9．限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（A，B，C，D，E）

A．限制酶无活性B存在抑制剂如SDS，EDTACDNA不纯

D．缓冲液组成不合适EDNA甲基化

10．下列关于限制酶的叙述正确的是（B，C，D）

A．在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。

B．限制酶在DNA中的识别/切割位点的二、三级结构影响酶切效率。

C．如果限制酶的识别位点位于DNA分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。

D．已知某限制酶在一环状DNA上有3个切点，因此该酶切割这一环状DNA，可得到3个片段。

E．能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。

11．酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（A，B，C，E）

A．储存温度不合适B稀释后储存C储存缓冲液不合适

D．分装后储存E储存缓冲液中蛋白浓度低

12．限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（A，B，C，D，E）

A．限制酶失活B有抑制剂如SDS，EDTA等存在C反应条件不合适

DDNA不纯EDNA结构（线形或超螺旋）的影响

13．如果用限制酶切割DNA后得到的片段比预期的多，可能原因是（B，C，E）

A．限制酶失活B限制酶的星号活性C有其他限制酶污染

D有抑制剂存在E测试DNA中有其他DNA污染

14．限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（A，B，C，E）

A．限制酶去除不完全B平端连接C核酸外切酶污染

D．连接反应温度低于16℃

E．从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类

15．下列限制酶属同裂酶的是（A，B，D，E）

A．BamHIG↓GATCCSau3AI↓GATC

CCTAG↑GCTAG↑

B．SalIG↓TCGACXhoIC↓TCGAG

CAGCT↓GGAGCT↓C

C．BamHIG↓GATCCEcoRIG↓AATTC

CCTAG↓GCTTAA↓G

D.HpaIIG↓CGCMspIC↓CGG

CGC↓GGGC↓C

E.XbaIT↓CTAGANheIG↓CTAGC

AGATC↓TCGATC↓G

三．填空题

1．限制酶是一类专门切割DNA的酶，它能特异性识别切割双链（单、双）DNA。

2．II型限制酶识别位点一般长度为4~6个核苷酸对。

3．个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性（RFLP）。

4．限制酶命名采用Smith和Athens提议的方案，第一个字母大写取自来源细菌的属名；

第二、三个字母取自来源细菌的种名；

第四个字母（如果有）取自来源菌的株系。

5．需要部分酶切时可采取的方法有

（1）减少酶的用量

（2）缩短反应时间（3）增大反应体积。

6．限制酶识别序列为n个碱基，则其切割频率的理论值应是4n。

7．限制性切酶通常保存在50%浓度的甘油溶液中。

8．甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一，在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在5%以下。

9．限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的限制和对自身DNA的修饰来实现的。

10．II型限制酶既具有识别位点的专一性，也具有切割位点的专一性。

它作用时需要Mg2+离子作辅助因子。

四．简答题

1．在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（BSA）的目的与机理是什么？

答：

目的是保护酶的活性；

机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度，防止切酶失活。

2．如果用EcoRI酶切DNA时出现星活性，试分析原因？

主要原因有：

酶浓度太高；

高PH；

低盐；