血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定作业指导书Word文档下载推荐.docx
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15~25℃保存:
<
10%;
标本稳定性:
4~8℃保存稳定7天;
-20℃保存至少可稳定2个月标本。
如果分析延迟8小时以上,最好把血清冷藏。
冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。
4.标本运输:
常温条件下运输
5.标本拒收标准:
细菌污染的不能做测定。
6.实验材料:
6.1上海申能ALP测定试剂盒(14104171701试剂16×
64ml+试剂26×
16ml)
6.1.1试剂组成
试剂1:
2-氨基-2甲基-1-丙醇(AMP)缓冲液0.90mol/L(pH:
10.4)
醋酸镁1.6mmol/L
硫酸锌0.4mmol/L
HEDTA2.0mmol/L
试剂2:
磷酸对硝基酚16.0mmol/L
6.1.2试剂准备:
试剂为即用式。
6.1.3试剂稳定性与贮存:
原试剂避光保存于2~8℃,若无污染,可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4变质指示:
当试剂有浊度时,表明有细菌污染,不能继续使用。
6.1.5注意事项:
碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠,避免接触皮肤及粘膜。
反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性,切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。
若反应液与皮肤或粘膜接触,请速用水冲洗。
6.2校准品:
使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3质控品:
参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7.仪器:
奥林巴斯AU1000生化分析仪
8.操作步骤
8.1项目基本参数:
参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤:
参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件
9.检验结果的判断与分析
10.质量控制:
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11.计算方法:
以TruCalU复合校准品ALP校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果。
不使用校准品进行ALP活力检测,可以直接使用ΔA/min均值乘以计算因子得到结果,但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。
计算ALP活力的计算因子见下:
ΔA/min×
因子=ALP活力[U/L]
底物起始的反应(37℃)样品起始的反应(37℃)
05nm34332757
12.参考值范围
成年人[4]
男性20~50岁53~128U/L
男性60岁以上56~119U/L
女性20~50岁42~98U/L
女性60岁以上53~141U/L
儿童[5]
男性女性
1~30天75~319U/L48~406U/L
1个月~1岁82~383U/L124~341U/L
1岁~3岁104~345U/L108~317U/L
4岁~6岁93~309U/L96~297U/L
7岁~9岁86~315U/L69~325U/L
10岁~12岁42~362U/L51~332U/L
13岁~15岁74~390U/L50~162U/L
16岁~18岁52~171U/L47~119U/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。
13.临床意义[1,2]:
碱性磷酸酶(ALP)是一种在碱性条件下具有较强活性的水解酶,并以多种形态存在于血液中,其大多来自骨骼的成骨细胞和肝脏,也来源于其他一些组织例如肾脏、胎盘、肠、睾丸、胸腺、肺及肿瘤。
在儿童生长期和妊娠期,血清中ALP生理性活性增高,骨疾病与肝胆疾病等引起ALP病理性活性增高。
在肝胆疾病中引起ALP活性增高的原因包括胆道梗阻,例如因胆结石、肿瘤或炎症造成的胆汁郁积。
在传染性肝炎中也可发现ALP活性增高。
在骨疾病中,Paget病、骨软化症(佝偻病)、骨转移瘤和甲状旁腺功能亢进等,使成骨活性升高引起ALP活力增高。
14.操作性能
14.1线性范围2~850U/L
14.2精密度:
精密度的评估是根据NCCLS推荐的典型方法5,AU1000批内不精密度小于5%,总不精密度小于10%。
用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则7。
批内精密度
n=20
(U/L)
s
CV
(%)
批间精密度
样品1
97.8
1.15
1.18
103
1.06
1.02
样品2
189
1.82
0.96
188
1.04
0.55
样品3
235
1.68
0.72
236
1.64
0.70
14.3方法学比较:
本公司试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x),同时对78个样品进行ALP活力检测,将检测结果作方法学比较,其统计结果如下:
y=1.00x+0.00U/L;
r=0.999。
14.4灵敏度:
本试剂的检测限为2U/L。
14.5病人结果可报告范围:
2~850U/L
15.超出范围结果处理:
本法对ALP活力检测的最大ΔA/min在405nm为0.25。
当样品测定值超过上限时,应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+9稀释,重新测定,结果乘以10。
16.病危报警值的处理
17.方法局限性
17.1本法对ALP活力检测的最大ΔA/min在405nm为0.25。
当样品测定值超过上限时,应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+9稀释,重新测定,结果乘以10。
17.2干扰物质:
当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L,胆红素浓度684mol/L,血红蛋白浓度2.00g/L,甘油三酯浓度22.6mmol/L时没有观察到干扰
18.补救措施:
当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。
19.参考文献
1.ThomasL.ClinicalLaboratoryDiagnostics.1sted.Frankfurt:
TH-BooksVerlagsgesellschaft;
1998.p.36-46.
2.MossDW,HendersonAR.Clinicalenzymology.In:
BurtisCA,AshwoodER.editors.Tietztextbookofclinicalchemistry.3rded.Philadelphia:
W.B.SaundersCompany;
1999.p.617-721.
3.TietzNW,RinkerD,ShawLM.IFCCmethodforalkalinephosphatase.JClinChemClinBiochem1983;
21:
731-48.
4.BurtisCA,AshwoodER.editors.Tietztextbookofclinicalchemistry.3rded.Philadelphia:
1999.p.1829.
5.SoldinJS,HicksJM.Pediatricreferenceranges.Washington:
AACCPress,1996.p.5.
20.其他:
仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。