山大微生物实验报告——霉菌的形态观察Word格式.doc
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【实验原理】
霉菌
霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约3～10μm），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
观察方法
观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法）。
载玻片培养观察法（小室培养法）
用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。
培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。
这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。
【实验器材】
1.菌种：
曲霉（Aspergillussp.），青霉，根霉（Rhizopussp.），毛霉（Mucorsp.），培养7d的马铃薯琼脂平板培养物
2.培养基：
马铃薯培养基（简称PDA）（配方见附表）
3.仪器或其他用具：
平皿，载玻片，盖玻片，无菌吸管，U型玻棒，解剖刀，镊子，50%乙醇，20%甘油，显微镜，接种环，酒精灯等
【实验步骤】
1.载玻片培养观察法（小室培养法）
（1）.培养小室的灭菌：
在平皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一Ｕ形玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，包扎后于110℃灭菌20～30分钟，烘干备用。
（2）.琼脂薄片的制作：
取已灭菌的马铃薯琼脂培养基各6～7ml注入另两个灭菌平皿中，使之凝固成薄层。
通过无菌操作，用解剖刀将其切成1cmx1cm的琼脂块，并将其移至上述培养室中的载玻片上（每片放两块）。
（3）.接种：
通过无菌操作，用接种环从斜面培养物上挑取很少量的孢子，接种于培养小室中琼脂块的边缘上，用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。
（4）.培养：
通过无菌操作，在培养小室中的圆滤纸上加2～3ml灭菌的20%的甘油（用于保持平皿内的湿度），盖上皿盖，27℃正置培养一周。
（5）.镜检：
根据需要可以在不同的培养时间内取出载玻片置低倍镜下观察，必要时换高倍
镜。
【实验结果与分析】
表
（一）四种霉菌形态特征表
菌种
根霉
毛霉
曲霉
青霉
形态特征
菌丝无隔、多核、分枝状，有匍匐菌丝和假根。
在假根的上方直立地生长出一至数根孢囊梗，其顶端膨大成球形孢子囊。
囊的基部有囊托，中间有球形或半球形囊轴。
囊内产大量孢囊孢子，有性生殖时由不同性别的菌丝或匍匐菌丝上生出配子囊，配子囊双双异宗配合形成一接合孢子。
菌丝无隔、多核、分枝状，无假根或匍匐菌丝。
菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗。
各分枝顶端着生球形孢子囊，无囊托。
营养菌丝具有分隔；
气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗，顶端膨大成球状顶囊，表面辐射出一层或两层小梗，小梗上着生成串的球形分生孢子。
分生孢子梗生于足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连。
菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。
基部无足细胞，顶端不形成膨大的顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。
小梗顶端有孢子。
绘图表示各种霉菌
图1根霉图2毛霉
图3曲霉图4青霉
小
小室培养法图示
【实验图示】
图5根霉菌图6根霉菌假根
图7曲霉菌10*10图8分生孢子梗及假根10*40
图9球状顶囊及孢子梗10*40图10毛霉菌10*10
图11毛霉菌局部放大图12青霉菌图13青霉菌
【注意事项】
载玻片培养观察中，注意无菌操作，接种量要少，同时尽可能将分散的孢子接种在琼脂块边缘上，否则培养后菌丝过于稠密影响观察。
【思考讨论】
1.黑曲霉和黑根霉在形态特征上有什么区别？
答：
根霉菌无隔，有匍匐菌丝和假根，假根周生处有直立的向上孢子囊梗，其顶端膨大成孢子囊，孢子囊地步有半球形囊轴。
黑曲霉菌丝有隔，且菌丝体分枝，气丝分化成分生孢子梗，顶端膨大形成球型顶囊，顶囊表面辐射出一层或两层小梗，小梗上有一串串分生孢子。
【附表】马铃薯培养基配方（PDA）（1000mL）
马铃薯
200g
葡萄糖（蔗糖）
20g
琼脂
22～25g
水
1000ml
PH
自然
马铃薯去皮，切成块煮沸20～30min，然后用1层及6层纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补水至所需量，110℃灭菌20～30min。
（这份报告质量不是很好哦）图示不是很正确
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