高级食品检验工实操资料乳酸菌检测Word格式.doc
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1、用25ml吸量管吸取25ml酸奶放到装有225ml的无菌水的锥瓶中混匀，制成10-1的稀释级；
2、用1ml灭菌吸管吸取10-1稀释液1ml，沿管臂慢慢注入还有9ml的无菌水的试管里，振摇混匀即得10-2的稀释级，同理制成10-3，10-4一直到10-7。
注意每递增稀释一次，必须另换1支1mL灭菌吸管；
3、选择三个稀释级来做平板，选10-510-610-7
4、每个稀释级做两个平板，对应每个平板加1ml的稀释液；
5、加培养基（混菌平板的制备），6套平皿都加上培养基，但要注意培养基的温度。
6、同时要做一个空白实验，即是在一个平皿中加入1ml的无菌水，然后再加入培养基。
注意从1到6点的操作不要超过20分钟。
二、鉴定及出报告（老师准备两个已经培养好菌的平板，一个用来计数，一个用来做革兰氏染色镜检，看清标记）
1、从平板中挑取5个菌落进行镜检（做5张片）
革兰氏染色法：
涂片→干燥→固定→结晶紫初染（1min）→水洗→卢戈碘液媒染（1min）→水洗→95%乙醇脱色（20-30s）→水洗→番红复染（1min）→水洗→干燥→镜检（油镜观察、用香柏油）→清洁显微镜（先用擦镜纸擦一遍，接着滴1到2滴二甲苯到擦镜纸上再擦镜头，最后再用干净的擦镜纸再擦一遍镜头）。
在油镜头下观察到的结果要让考官看并打分。
乳酸菌：
革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性、无芽孢的球菌或者杆菌。
注意：
本次的乳酸菌是兼性厌氧菌，可能有的会长在培养基里面，所以用接种针挑菌时一定要挑开培养基。
2、过氧化氢酶试验：
就用刚挑过菌的接种针直接伸进3%过氧化氢试管中静止放置，注意观察接种针周围是否有气泡。
无气泡为过氧化氢酶阴性，有气泡则为阳性。
3、结果报告：
用表格来完成
考生学校：
考生姓名：
考生准考证号：
乳酸饮料中乳酸菌的检测结果记录及报告
菌落
革兰染色结果
过氧化氢酶试验（阴或阳）
是否乳酸菌判断
形态
颜色
是否有芽孢
结果判断
1
2
3
4
5
计数平皿中的菌数
计数平皿的稀释级
计数结果
例：
检验10-6的稀释级在改良MC琼脂平板上，生成的可疑菌落数为200个，选取5个菌落鉴定，证实为乳酸菌是4个，则1ml检样中乳酸菌数为200×
4/5×
106
三、评分标准
考核要素评分要素配分评分标准
基本操作平皿接种操作10分接种正确、熟练、符合要求（10-9分）
较熟练、基本符合要求（6-9分）
不符合要求（5分以下）
基本操作革兰染色镜检操作12分染色操作熟练，镜检现象清晰（12-9分）
颜色操作基本正确、镜检现象尚清晰（8-6分）
过氧化氢酶试验8分实验操作熟练、正确（8-6分）
实验操作不熟练、理解不明显（5分以下）
试验结果实验程序、现象、报告10分程序正确、实验现象清晰、报告正确（10-9分）
程序基本正确、不熟练、实验现象较清晰、报告基本正确（8-6分）
程序不熟练、报告不正确（5分以下）
四、注意事项
大家可以看检验标准，要熟悉整个检验程序，记住操作步骤，注意无菌操作的要求，熟悉吸量管的使用，注意每递增稀释一次，必须另换1支1mL灭菌吸管。
为防止细菌增殖产生片状菌落，在检液加入平皿后，应在20min内倾入培养基，并立即使之与培养基混合均匀。
检样稀释及混合平板制备整个过程要严格遵照无菌操作要求。
五、考核结束后
每个同学要把用过的器具洗干净（平板培养物不能洗），同时准备好1个锥瓶的水放回
原位（大锥瓶装约225ml自来水），准备7支约9ml的自来水；
桌面收拾干净。
（最后一批考生不用装水），把自己实验做的平板里的培养基回收到指定位置。
酸乳中乳酸菌的测定稀释图
9.0ml
10-7
10-6
10-5
10-3
10-2
无菌水
10-1
1ml
。
25ml供试品
无菌水
各平皿加1ml对应的溶液
（36±
1）℃
改良MC
培养基
倒置培养72h
对照
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