香菇菌种生产的方法与步骤Word格式.docx
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(pH5、0~5、5),用于分离菌种.
五就是麦芽浸膏、酵母浸膏、琼脂培养基(MYD):
麦芽浸膏3克,葡萄糖10克,酵母浸膏3克,琼脂20克,蛋白胨5克,水1 000毫升(用于菌种培养)。
六就是麦芽浸膏、蛋白胨培养基(MPA):
麦芽浸膏20~25克,蛋白胨10克,琼脂20克,水1 000毫升(用于分离、培养、保存菌种)。
上述6个培养基配方中,马铃薯、葡萄糖、琼脂(PDA)配方应用最普遍。
在此着重介绍PDA培养基得配制方法与步骤:
1。
制备培养基得操作程序
选择优质马铃薯,去皮或挖去发芽眼,削去发青皮,切成薄片,称取200克,置于钢精锅,加水1000毫升,煮沸后小火保持30分钟,趁热用8层纱布过滤后放人有1000毫升刻度得量杯(或量筒)中,补充水到1 000毫升,倒回钢精锅,加琼脂继续加热,待琼脂溶化后,再加葡萄糖,再补水至1000毫升,用玻璃棒搅均匀,趁热分装试管,或装入三角瓶备用.
2.分装试管
将配制好得PDA培养基,趁热(60℃)倒人事先准备好得量杯或玻璃漏斗,分装试管。
每支试管装培养基为管长得1/4,培养液不可贴附管口内壁,如有沾附物必须揩拭干净。
3。
做棉塞
取适量棉花做成较紧实得棉塞,塞入试管约2厘米左右,外留1厘米,紧贴试管内壁,松紧度以用手指提起棉塞而不脱掉为宜,光圆不起皱(如图3-1),尔后将试管放入铁丝筐内。
4.灭
菌
将装有培养基得试管放人灭菌锅得铁丝筐内,上面盖上牛皮纸或聚丙烯塑料薄膜,包扎好,以防棉塞受潮。
加热灭菌时,排尽锅内得冷气,当温度升到121℃时,维持30分钟后停止加热。
待指针回到零点,先打开锅盖得1/10开度,等到无直冲蒸气时,再打开全部锅盖,取出试管。
5.在斜面上摆放试管
将取出得试管冷却到50~60℃后,放到用木架或木条摆成一定角度得斜面上,小试管斜面长2厘米,大试管(18×
200)斜面长6厘米左右.待完全凝固后,收取备用。
6.灭菌效果检查
随机取3管斜面,放在28℃下进行空白培养5~7天后,检查斜面上有无细菌与霉菌菌落。
如果发现有杂菌,说明灭菌不彻底,要重新灭菌。
(二)接种与培养
1。
接
种
在无菌室(接种室)或接种箱内,酒精灯火焰旁进行无菌操作。
具体程序如下:
左手拿菌种管与待接种得斜面试管,右手拿接种耙,在火焰上来回烧红,拔去菌种管得棉塞,将管口在火焰上烧一下,再把接种耙烧一下,迅速插入种管,稍加冷却,切取米粒大小菌丝块(一定要带培养基),迅速放入待接种管斜面中心位置(为争取时间,在斜面接两点以上为宜),拿出接种耙后,再把管口烘烤一下,烧一下棉塞,迅速塞好棉塞,灼烧一下接种耙。
到此即完成了一个接种程序,以下依此类推。
2.培
养
将接种后得试管,放入培养箱或培养室进行恒温培养(25℃±
1℃),或利用适宜得自然气温培养.要保证培养室空气新鲜,环境干净,无光或弱光。
为此,必须保持空气相对湿度
70%左右,在试管上盖上纱布,或盖上薄棉毯,拉上窗帘,形成无光培养。
因试管斜面长短不同,一般需经8~14天培养,才能长满试管斜面.
(三)母种质量检查及提高纯度对策
1.斜面优质菌丝形态
在马铃薯、葡萄糖、琼脂(PDA)培养基斜面上,菌丝生长洁白,呈棉绒状,密度一致,前沿菌丝(先端)整齐,粗壮.有得棉绒状菌丝发达,如苏香1号,Cr-02;
有得棉绒状菌丝不发达,如271A,271B,早生一号。
后者比前者菌丝生长快,但菌龄较长。
2.斜面菌丝不纯现象
在斜面上菌丝灰白,棉毛菌丝不平坦不整齐,前沿菌丝不齐、有缺口,这说明有杂菌污染。
如斜面上有异色,可能就是镰刀菌污染。
如斜面上特别就是菌丝边缘出现粘稠状物即蜡状、油状,可能就是细菌污染。
如斜面上呈黄、绿、黑等颜色,则可肯定就是霉菌污染。
若斜面产生色素,也表明有杂菌污染.将斜面对着光瞧背面,如有小黑点遮光,说明杂菌菌落被香菇菌丝覆盖了。
3.提高香菇母种纯度得措施
必须使培养基彻底灭菌,严格无菌操作,保持培养环境干燥、清洁、恒温、无光、空气流畅,从而保证菌丝健壮生长。
如发现母种有异常现象,应予剔除。
二、原种生产与质量标准及保证对策
原种与栽培种得培养料配方制作技术基本相同,只就是装料容器大小不同。
因此,本节只介绍原种生产技术,栽培种生产技术在相关章节中介绍.
(一)培养料配方选择
共有7个配方可供选择,前3个为常用配方,后4个为参考配方。
①木屑78%,麸皮(或米糠)20%,蔗糖1%,石膏1%。
②木屑63%,棉籽壳20%,麸皮15%,蔗糖1%,石膏
1%。
⑧木屑60%,蔗渣18%,麸皮20%,蔗糖1%,石膏1%。
④稻草(麦草)58%,砻糠30%,木屑10%,糖1%,石膏1%。
⑤发酵松树、杉树木屑50%,木屑28%,麸皮20%,糖1%,石膏1%.⑥棉籽壳40%,木屑40%,麸皮18%,糖1%,石膏1%。
⑦花生壳80%,杂木屑19%,石膏1%。
上述7个配方都要求含水量在60%左右,氢离子浓度(pH值)随自然情况。
配方中各原料一般在3个月前备好。
(二)培养料配制得方法与步骤
1.时间安排
春、秋、冬季节皆可,晴天或阴天配料装瓶最为理想。
夏天宜在每天早、晚配料装瓶,应在4小时内装好瓶。
2。
生产组织
使用一台机器,由6人操作.其中1人向斗内铲料,1人装瓶,1人洗瓶,2人做棉塞,1人运输。
配料前得木屑处理
首先过筛(2~3目),用竹筛或铁筛皆可,筛除掉有棱角得木块、木条、木片等硬物。
然后,按照生产计划与配方成分(百分率),称好主料、辅料与添加剂。
接着,将各种原料混合拌匀,有机器用机器拌,无机器用人工来回拌3~4次.最后,再加入适量得水,继续用机器拌3分钟或用人工拌3~4次。
对出现得团块一定要拍散,或用铁筛过筛.
在配料过程中,需灵活掌握以下3点:
(1)灵活掌握含水量:
对干料、细料、质松料,加水宜多一些;
对粒硬、吸水差得料,加水宜少一些。
在晴天、高温、秋千天气而水蒸发量较大时,加水宜多些;
在阴雨、空气偏湿而水不易蒸发时,则加水宜少一些。
在水泥场地拌料,加水可少一些;
在干泥渗水场地拌料,加水宜多一些。
在高海拔地区,加水宜多一些
(2)拌料要均匀:
要做到主料、辅料、添加剂均匀,干湿均匀,酸碱度均匀,不结块。
(3)操作要敏捷快速:
在气温28℃,如拌料灭菌时间过长,则料易变酸,接种后轻则发菌慢,重则不发菌,而且易使杂菌病毒发生.因此,必须根据机械化水平与劳动者得技术熟练程度,安排好每日得生产量,保证适时快速装袋(瓶),及时灭菌。
在高温期间从拌料到灭菌,不能超过4小时;
在低温期间从拌料到灭菌,要求不过夜。
(4)搞好环境卫生:
选用得原材料要无霉变,配料前要曝晒,拌料装瓶环境要清洁,尽量减少空气中得杂菌孢子率.
(三)装瓶(袋)
使用机器装瓶,平均每人每日可装720多瓶。
具体操作程序如下:
装料至瓶颈,清洁瓶口,用小木棒或试管将料压实,并呈凹式,将瓶口内外壁洗净。
(四)做好棉塞
取一块完整而略大于掌心得棉絮,其大小厚薄正好适合瓶口得大小长短,平摊在左掌心,右手捏住棉絮边缘往内卷成圆形,尔后用右手得拇指与中指相对捏住棉絮,接着用左手得
拇指与食指也相对捏住棉絮,再用右手趁势捏成棉球,塞人管口或瓶口2/3处.
(五)灭菌
常用得高压灭菌锅分为立式或卧式两种。
在高度密封得高压锅内,通入高压蒸气,达到彻底灭菌得方法,称为高压蒸气灭菌,又叫湿热灭菌.原种与栽培种得培养料,由于不易被
蒸气穿透,灭菌时必须在150千帕即1.5千克/厘米2。
条件下灭菌2、0~2、5小时。
在灭菌得全过程中,要严格操作规程,并注意掌握3点:
①料瓶与料袋排放密度要适当,使蒸气流畅,无死角。
②通蒸气前,检查安全阀就是否灵活,有无故障.③通蒸气后,打开排气阀,驱散锅内冷空气(自身发生蒸气得高压锅应加足水),或关上排气阀,接通蒸气。
待压力升至0、5千克/厘米。
时,开阀放气。
待指针回到0位时,保持5分钟,再关上排气阀。
等压力升到1、5千克/厘米。
时,灭菌2、0~2、5小时。
然后让其自然冷却,当压力指针回到0位时,打开锅盖或门得1/4开度,继续让热烘烤棉塞,防止骤冷。
接着趁热取出料瓶(袋),送入清洁消毒过得冷却室。
也可以用常压灭菌法,常用得就是灭菌灶或灭菌箱。
以低压蒸气进行灭菌得方法,称为常压蒸气灭菌法。
这种灭菌法投资省,可自行建造,取材容易,成本低廉,适用于农村。
缺点就是灭菌时间长,能耗大.常压灭菌法得具体操作程序就是:
①当点火发生蒸气时,打开放气阀排出冷空气,直至见到放出得直冲蒸气后,再排气5分钟,接着关上阀门,待气温升到100~102℃时,开始计时,连续保持8小时以上。
②料瓶叠放,瓶颈朝内,瓶底朝外。
料袋按品字形叠放,以求压力平衡。
行间要留有间隙。
③点火前,将铁锅内加足水.在灭菌得全过程中要注意铁锅内得水位,保持通水流畅,且水温较高。
④在灭菌得全过程中,火力应按猛攻→恒温→徐降得程序掌握。
即开始升温火力宜猛,尽快达到100℃,防止升温缓慢,时间过长,引起原料变酸。
当温度升到100℃时,要保持温度不变,不能时高时低,以免影响灭菌效果。
当到达灭菌时间后,让仓(膛)内温度缓缓降低,直降至60℃,方可开门取物.
(六)冷却接种
①接种前必须使料瓶(袋)冷却到适宜温度,防止高温接种热死种菌。
接种前半小时,将原种瓶、接种工具及用品放入接种箱(或接种室),然后用5 %石炭酸液向上下周壁喷雾消毒,并开启紫外线灯照射灭菌半小时。
启用久停不用得接种箱(室),事先必须用高锰酸钾与甲醛薰蒸处理。
②接种时,操作人员进入接种室前,先用肥皂洗手,换工作服,戴上口罩与工作帽,穿上工作鞋,手在1%~2%来苏儿液或0、25%新洁尔灭液中浸泡2分钟.尔后,用5%石炭酸液,对接种室上下及四壁、工作台、凳等喷雾消毒,边喷边后退到缓冲室,关上接种室得门。
待5分钟后,将菌种带入室内进行接种操作。
③接种前1分钟,用75%酒精擦手,严格无菌操作(同母种无菌操作法),要求有序不乱,操作敏捷快速,减少室内空气流动。
接种时,将种管用脱脂棉蘸上75%酒精,进行种管外壁消毒。
接着,拔取棉塞,用火焰烧一下管口(或瓶口),把烧过得接种耙迅速插入种管内冷却.尔后将斜面前端1厘米长得菌丝块挖去,剩余斜面分成4~6段,分别取出接人原种瓶得穴位中心。
一管母种可接4~6瓶原种。
(七)接种结束后得工作
接种完成后,立即将台面收拾干净,将各种剩余物,如种管、洒落得培养基、消毒