计数培养基适用性检查验证方案文档格式.doc

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小组人员职务

姓名

所在部门

职务

组长

质量部

经理

组员

检验员

4.2验证人员职责及要求

4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。

4.2.2认真观察并做好验证原始记录。

4.2.3对实施验证的结果负责。

5.合格标准：

被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。

6.试验材料：

6.1.被验证产品：

营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基

6.2.仪器设备：

6.2.1.*********蒸汽灭菌器

6.2.2.*********净化工作台

6.2.3.*********净化操作台

6.2.4.*********霉菌培养箱（23～28℃）

6.2.5.*********电热恒温培养箱（30～35℃）

6.2.6.*********远红外烘箱

6.2.7*********电热鼓风干燥箱

6.2.8*********微波炉

6.3.验证用培养基

名称

生产厂家

批号

营养琼脂培养基

营养肉汤培养基

玫瑰红钠琼脂培养基

改良马丁培养基

改良马丁琼脂培养基

营养琼脂对照培养基

玫瑰红钠琼脂对照培养基

酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基

6.4.验证用菌株：

（第代）

验证菌株

培养基

培养温度

培养时间（小时）

大肠埃希菌

营养肉汤

30—35℃

18—24

金黄色葡萄球菌

枯草芽孢杆菌

白色念珠菌

23—28℃

24—48

黑曲霉菌

5—7（天）

7.菌液制备

7.1.接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，培养18～24小时；

接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24～48小时。

上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。

接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5～7天，加入3～5ml含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。

菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用。

黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。

8.菌液计数：

（每种菌液接种2个平皿）

大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别取1ml接种至营养琼脂培养基中，置30～35℃培养48小时；

白色念珠菌、黑曲霉分别取1ml接种至玫瑰红钠琼脂培养基，置23～28℃培养72小时。

菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表

菌落计数结果（cfu∕ml）

试验次数

10-5稀释

10-6稀释

10-7稀释

1

2

3

黑曲霉

9.适用性检查：

取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；

取白色念珠菌、黑曲霉各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培养72小时，计数；

取白色念珠菌50～100cfu，注入无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培养72小时，计数。

同时，用相应的对照培养基由中国药品生物制品检定所研制与分发。

替代被检培养基进行上述试验。

9.2.结果见附表

10.结论

附表1：

计数培养基适用性检查验证记录

试验时间年月日完成时间年月日

平皿号

供试品组

cfu∕ml

对照培养基组

回收率%

应≥70%

（培养3天计数）

--

平均值

（培养5天开始计数）

结论

复核人试验人