姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC.docx

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC.docx

《姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC.docx（5页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞凋亡影响

作者：

齐瑞芳于小玲尚芳芳赵辉

　　【摘要】目的观察姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞增殖和凋亡的影响。

方法分别用0、10、20、30和40μmol/L姜黄素作用PC3细胞48h后，CellCountingKit8（CCK8）法检测细胞存活率；选用0、5、10、20μmol/L姜黄素作用PC3细胞48h后，Hoechst染色观察PC3细胞形态的变化，AnnexinV/PI检测细胞凋亡率。

结果姜黄素能显著抑制PC3细胞的增殖（F=，q=～,P<）;除0与5μmol/L姜黄素组细胞凋亡率比较差异无显著性外，不同浓度姜黄素组之间细胞凋亡率比较差异有显著性（F=,q=～,P<）。

20μmol/L姜黄素作用PC3细胞48h后，倒置显微镜下可观察到部分凋亡细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变。

结论姜黄素能显著抑制体外PC3细胞的增殖，诱导细胞凋亡，为其应用于临床雄激素非依赖性前列腺癌的治疗提供了实验依据。

【关键词】姜黄素；前列腺肿瘤；PC3细胞；细胞凋亡

［ABSTRACT］ObjectiveToobservetheeffectofcurcuminonproliferationandapoptosisofPC3cellsinnonandrogendependentprostatecancer.MethodsDifferentconcentrationsofcurcumin0,10,20,30and40μmol/LwereusedtoactonPC3cellsfor48h,thesurvivalrateofthecellswasthendeterminedusingCellCountingKit8（CCK8）;0,5,10,and20μmol/LcurcuminwereusedtoactonPC3cellsfor48handthenthecellmorphologywasobservedbyHoechststaining.AnnexinV/PIwasappliedforapoptosisdetection.ResultsCurcumincouldsignificantlyinhibitthePC3cellproliferation（F=,q=,P<）.Thedifferencesofthecellapoptosisratesindifferentconcentrationgroupsweresignificant,exceptforthe0and5μmol/Lgroups（F=,q=－,P<）.Afteractingwith20μmol/Lcurcuminfor48h,themorphologicalchangessuchaschromaticagglutination,karyopyknosis,andnuclearfragmentationcouldbeseeninpartofapoptoticcellswithinvertedmicroscope.ConclusionCurcumincould,invitro,dramaticallyinhibitPC3cellproliferationandinduceapoptosis,whichprovidesanexperimentalevidencefortherapyofnonhormonedependentprostaticcancer.

［KEYWORDS］Curcumin;Prostaticneoplasms;PC3cells;Apoptosis

姜黄素是从多年草本植物姜黄中提取的一种酚类色素，它具有消炎、抗氧化、抗动脉粥样硬化和降血脂等作用[1]。

近年来，随着医学与分子生物学的发展，人们对姜黄素的抗诱变及抗癌作用有了进一步认识[2]。

姜黄素的抗肿瘤机制是多方面的，其中诱导肿瘤细胞凋亡的机制受到人们广泛的关注。

本实验选用雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞作为研究对象，观察不同浓度的姜黄素对PC3细胞凋亡和增殖的影响，为临床使用姜黄素治疗雄激素非依赖性前列腺癌提供实验依据。

现将结果报告如下。

1

材料与方法

材料来源

人前列腺癌细胞株PC3上海第二军医大学病理生理教研室卢建教授提供。

RPMI1640培养基、胎牛血清购自Gibco公司；胰蛋白酶、姜黄素和DMSO为美国Sigma公司产品；CellCountingKit8（CCK8）试剂盒、Hoechst染色试剂盒购自碧云天生物科技有限公司。

姜黄素用DMSO稀释成5×10μmol/L，过滤除菌后，置于-20℃保存，临用前解冻。

实验方法

细胞培养

人前列腺癌细胞PC3于含体积分数的胎牛血清、100kU/L青霉素、链霉素的RPMI1640培养液中，在37℃含体积分数的CO2培养箱中培养，每2～3d传代1次。

CCK8法检测细胞生长抑制率

将处于对数生长期的PC3细胞用g/L的胰蛋白酶消化，使其成为单细胞悬液。

血细胞计数板上计数，调整细胞密度为5×108/L，分别以每孔100μL接种于96孔板，继续培养24h。

细胞贴壁后分别加入姜黄素溶液使终浓度分别为10、20、30、40μmol/L，以不加药物为对照组，RPMI1640为阴性对照组，每组设6个复孔。

于24h后，每孔加10μL的CCK8，设置空白对照孔，CO2孵箱中继续孵育～h，测450nm处吸光度（A）计算细胞存活率。

肿瘤细胞存活率=（用药组A值/对照组A值）×100%。

Hoechst染色观察细胞形态学变化

细胞经消化计数后接种于盛有盖玻片的6孔板，密度为5×107／L，过夜，使盖玻片长满的细胞约为50%～80%。

用终浓度为0、5、10、20μmol/L姜黄素刺激细胞48h后，吸尽培养液，加入mL固定液固定10min。

去固定液，用PBS洗2次，每次3min，吸尽液体。

加入Hoechst33258染色液mL，染色5min，轻轻晃动。

用PBS洗2次，每次3min。

滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免出现气泡。

荧光显微镜下观察蓝色细胞核的形态。

AnnexinV/PI检测细胞凋亡率

选用5、10、20μmol/L浓度的姜黄素处理PC3细胞，48h后，将培养瓶内的细胞用4℃预冷的PBS洗2次，用250μL结合缓冲液重新悬浮细胞，调节其密度为1×109/L。

将100μL细胞悬液加入5mL流式管中，与5μL的AnnexinV/FITC和体积分数碘化丙锭溶液10mL混合，室温避光孵育15min，在反应管中加400μL的PBS，使用流式细胞仪检测细胞凋亡率。

统计学分析

应用SPSS及PPMS[3]统计软件进行统计学处理，各指标比较采用方差分析，组间比较采用q检验。

2

结果

姜黄素作用PC3细胞后体外存活率变化

0、10、20、30、40μmol/L浓度的姜黄素处理细胞48h后，细胞存活率分别为%、%、%、%、%，不同浓度姜黄素组之间细胞存活率比较差异均有显著性，且呈浓度依赖性（F=，q=～,P<）。

姜黄素对细胞凋亡形态影响

经不同浓度的姜黄素作用PC3细胞48h后，空白对照组的细胞核均匀着色，呈弥散状蓝色荧光，少有异常核（图1a）；10μmol/L姜黄素组出现少量早期凋亡细胞（图1b）；20μmol/L姜黄素组细胞出现典型的凋亡形态学变化，镜下可见染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变（图1c）。

不同浓度的姜黄素作用PC3细胞后细胞凋亡率的变化

选用0、5、10、20μmol/L的姜黄素处理PC3细胞48h后，其凋亡率分别为%、%、%、%。

除0与5μmol/L姜黄素组细胞凋亡率没有显著差异外，其他组之间比较差异均有显著性。

3

讨论

前列腺癌是欧美国家男性发病率最高的恶性肿瘤，仅2006年估计就有234460例新诊断病人[4]。

近年来，随着老龄化社会的进入，我国发病率也显著升高，对男性的健康具有很大的危害。

目前对于前列腺癌的治疗，尤其是雄激素非依赖型前列腺癌和前列腺癌发生转移病人仍然缺乏有效治疗手段[5]，研究开发新药成为国内外研究热点。

姜黄素是从中药姜黄的根茎中提取出来的一种脂溶性酚类色素，自1985年印度学者KUTTAN等[6]报道了姜黄素可以抑制DUHON淋巴瘤细胞以来，姜黄素的抗肿瘤作用日益引起人们的重视。

有研究表明，姜黄素可抑制体内、外多种肿瘤细胞的生长，诱导多种细胞株的凋亡，如人类白血病细胞株HL6[7]、人胃癌AGC细胞等[8]，其抗癌谱广泛，毒副作用小，是一种具有良好应用前景的天然抗癌新药，美国国立肿瘤研究所更将其列为第三代癌化学预防药。

本研究通过不同浓度姜黄素作用于前列腺癌非依赖性PC3细胞，采用CCK8染色法测定细胞存活率，证明姜黄素对癌细胞生长有明显抑制作用，呈剂量依赖性；Hoechst染色显示，经不同浓度的姜黄素作用PC3细胞48h后，10μmol/L姜黄素组出现少量早期凋亡细胞；20μmol/L姜黄素组细胞出现典型的凋亡形态，镜下可见染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变。

用AnnexinV/PI检测细胞凋亡率显示，细胞凋亡率呈一定的量效关系。

总之，本研究从细胞水平进一步验证了姜黄素的诱导肿瘤细胞凋亡的机制，为姜黄素应用于前列腺癌的治疗提供了实验依据。