HIV实验质量控制与质量管理程序.docx
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HIV实验质量控制与质量管理程序
HIV实验质量控制与质量管理程序
1.目的：
为HIV实验室各技术人员统一实验操作程序，保证实验检测质量，特制定本程序。
2.适用范围：
适用于HIV实验室技术人员。
3.规范性引用文件：
《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版）。
4.相关器材设备：
酶标仪、洗板机、标准血清。
5.安全防护器材与措施：
一次性乳胶手套、隔离衣、口罩、帽子，取用试剂时应把试剂视作感染性材料对待。
首先穿好一次性隔离衣，戴好口罩、帽子，最后戴好乳胶手套后再接触试剂进行试验。
6.操作步骤：
在每次实验中必须包含有内部对照质控血清和外部对照质控血清。
内部对照质控血清指试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。
内部对照是质量控制的基础。
每一次检测必须按照试剂盒使用说明书使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。
外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异而由实验室设置的一套对照血清，包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。
也可以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界值（Cut-off）的23倍为宜。
6.1质控血清的制备和保存（以ELISA试验检测HIV抗体为例）
6.1.1外部对照质控血清的制备
HIV抗体阳性和阴性血清，56℃30min灭活，3000r/min，离心15min。
弱阳性对照可以用HIV抗体阴性血清梯度稀释HIV抗体强阳性血清并标定后得到。
按一年使用量配制（可加入不影响检测结果的防腐剂）用0.2μm滤膜过滤除菌。
6.1.2外部对照质控血清的保存
6.1.2.1按一周实验用量分装、分类、标记、封口、-20℃冻存于非自动除霜冰箱中。
6.1.2.2外部对照血清不可反复冻融，一旦融化后应该存放28℃，供一周内使用。
6.1.3外部对照质控血清的使用
每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的重复性和稳定性。
同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。
6.1.4外部对照质控物的质量要求
质控物的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异（cv＜20%），并且质控物的成分应在稳定状态中。
质控物应无菌，并不含有影响ELISA反应的防腐剂。
6.2质控图的建立及应用（以ELISA试验检测HIV抗体为例）
最常用的质控图是Levey-Jennings质控图，使用累计和技术或趋势分析技术的图形可提供系统偏移和漂移的状况。
6.2.1建立质控图参数
外部对照质控物的平均值和标准差应建立在实验室常规使用方法对质控物重复测定的基础上。
一般采用在不同批次检测取得至少20个数据；如果仅做少量批次的检测，也至少做5个批次的检测，每个批次中不少于4个质控物测定结果，以建立一个临时性的平均值和标准差，当达到20批次数据后，替代临时性的平均值和标准差。
6.2.1.1算术平均值（）：
代表一组S/CO值的平均值。
为了统计学上有显著性意义，应该采用至少20次（天）所测得的外部对照质控血清S/CO值结果计算出平均值。
6.2.1.2标准差（s）：
是描述样品与均数之间离散程度的一个指标，是与对照质控血清S/CO值均值有关的预期范围。
一组S/CO值的标准差以s表示。
6.2.1.3变异系数（cv）：
是反映各次S/CO值相对于均值离散程度的一个指标，可以用来衡量检测的重复性或精密度。
6.2.1.4控制限：
由实验室根据对质控物检测结果的平均值和标准差来确定。
例如12S质控规则的控制限为外部对照S/CO平均值加减2个标准差；13S质控规则的控制限为外部对照S/CO平均值加减3个标准差。
计算公式为：
Σx
=──
n
s计算公式为：
───────
∑（xn-）2
s=───────
n-1
cv计算公式为：
s
cv=──-x100%
6.2.2绘制质控图
质控图是把检测数据与已确定的（计算出的）“控制限”进行比较的图，包含一条中心横线和其上、下两条平行的控制线，并按时间顺序点入本实验室每次试验质控血清的测定值。
质控图的绘制步骤：
6.2.2.1在常规条件下，对同一批血清连续测定20次（天）或以上，获得一组S/CO值，求均数（
）和标准差（s）,超出2s或3s的数据不应删除。
6.2.2.2将均值（
）和标准差（s）分别在质控框架图中标示出来。
以S/CO值作纵座标（Y轴），每一次（天）试验作横座标（x轴），绘制质控图。
6.2.2.3从第21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。
6.2.3质控规则及使用
实验室在报告实验结果之前必须评价质控数据，可通过图形记录的检查或由计算机审核结果来决定。
目前许多质控规则已被采用，常用的是12S和13S规则。
6.2.3.1告警（12S）：
当外部对照的S/CO值超出
+2s范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。
若将12S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。
6.2.3.2失控（13S）：
当外部对照的S/CO值超出
+3s范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部对照滴度下降造成。
6.2.3.3位移：
连续几次（35次）外部对照S/CO值都落在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。
6.2.3.4趋势：
连续几次（57次）外部对照S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。
质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，即具有高的检出分析误差的能力，同时应具有较低的假失控概率。
考察试验系统的可靠性应采用多标准质控方案，多规则质控方法能提高误差检出，并具有低的假失控概率。
其要点为：
出现一次2s范围的变化时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。
出现下列情况时，应暂停检测查找原因：
出现一次3s范围的变化、连续两次出现同一方向2s范围的变化、连续四次出现同一方向的1s范围的变化、连续10次结果都在1s范围内，但落在均值线的同一侧。
6.2.4质控图的分析及失控处理
实验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。
当质控已有计划并恰当地执行时，要求可靠的平均值和标准差用于计算质控限，将假失控概率降到最低。
当出现失控时进行如重复质控测定或重新分析新的质控物不是最有效的方法，必须找出问题原因，找出解除故障的方法，并消除原因，防止将来出现同样的问题。
6.2.5绘制和分析质控图的要点
6.2.5.1要在常规条件下建立质控图参数，用S/CO比值绘制质控图。
对同一批质控物连续测定得到20个数据，求均值（
）和标准差（s）,超出2s或3s的数据不应删除。
6.2.5.2由专人负责建立质控图，每月定期召开质控分析会，讨论本月的质量控制情况。
6.2.5.3建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒，更换不同厂家的试剂盒后，必须重新绘制质控图。
改用新批号试剂盒也应重新制作质控图。
使用新批号或不同厂家的试剂盒必须在质控图上注明使用日期。
6.2.5.4发现质控结果失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原因并决定是否发出检测报告。
6.2.5.5使用新批次的外部对照质控物时，必须重新绘制质控图。
变异系数（cv）小于20％，表示外部对照处于稳定状态。
6.3“即刻法”质控
“即刻法”质控方法是在对同一批外部质控血清连续测定3次后，即可对第3次检验结果进行质控。
具体计算方法如下：
6.3.1将质控血清的测定值从小到大排列：
x1，x2，x3……xn（x1为最小值，xn为最大值）。
6.3.2计算和s。
6.3.3计算SI上限值和SI下限值。
SI上限=
X最大值-
s
SI下限=
-X最小值
s
6.3.4将SI上限、SI下限与SI值表（表7）中的数字比较。
表7SI值表
n
n3s
N2s
n
n3s
n2s
3
1.16
1.15
12
2.55
2.29
4
1.49
1.46
13
2.61
2.33
5
1.75
1.67
14
2.66
2.37
6
1.94
1.82
15
2.71
2.41
7
2.10
1.94
16
2.75
2.44
8
2.22
2.03
17
2.79
2.47
9
2.32
2.11
18
2.82
2.50
10
2.41
2.18
19
2.85
2.53
11
2.48
2.23
20
2.88
2.56
（1）当SI上限和SI下限继续重复以上各项计算。
（2）当SI上限和SI下限有一值处于n2s~n3s值之间时说明该值在2s3s范围，处于“告警”状态。
（3）当SI上限和SI下限有一值>n3s值时说明该值已在3s范围之外，属“失控”。
数值处于“告警”和“失控”状态应舍去，需重新测定该质控血清和病人样品。
舍去的只是失控的这次数值，其它测定值仍可继续使用。
6.4注意事项：
出现一次2s范围的变化时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。
出现下列情况时，应暂停检测查找原因：
出现一次3s范围的变化、连续两次出现同一方向2s范围的变化、连续四次出现同一方向的1s范围的变化、连续十次结果都在1s范围内，但落在均值线的同一侧。
6.5绘制和分析质控图的要点：
（1）要在最佳条件下建立质控图参数。
（2）用S/CO比值绘制质控图。
（3）由专人负责建立质控图，每月定期召开质控分析会，讨论本月的质量控制情况。
每次检测之前都应了解质控结果。
（4）建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒。
（5）更换不同厂家的试剂盒后，必须重新绘制质控图。
改用新批号试剂盒如结果偏离较大也应重新制作质控图。
使用新批号或不同厂家的试剂盒必须在质控图上注明使用日期。
（6）如发现质控值剧烈位移或失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原因并决定是否发出检测报告。
（7）使用新批次的外部对照质控血清时，必须重新绘制质控图。
（8）发现质控结果失控
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