检验科PCR室作业指导书.docx
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检验科PCR室作业指导书
PCR室作业指导书
文件编号：
ABCD-3-PR-01~31
第A版
编制：
审核：
批准：
生效日期：
20XX年X月X日
ABCD人民医院检验科
编制说明
本分册文件可以作为单独申请卫生部PCR实验室认可的全套作业文件，因此作为ISO15189质量管理体系的PCR室作业文件，要对其重复部分进行删减，各检验科根据各自用途要求与特点进行选用，特此说明。
2006年8月8日
序号
主题内容
代号
页号
1
PCR实验室的设置及管理
ABCD-3-PR-01
7
2
PCR实验室工作制度
ABCD-3-PR-02
8
3
PCR实验室内务管理制度
ABCD-3-PR-03
9
4
PCR实验室人员的配置及管理
ABCD-3-PR-04
10
5
PCR实验室清洁程序
ABCD-3-PR-05
12
6
PCR标本唯一标识编号规则
ABCD-3-PR-06
13
7
PCR基因扩增实验室的要求
ABCD-3-PR-07
14
8
PCR废弃物的处理程序
ABCD-3-PR-08
17
9
基因扩增检测及结果分析
ABCD-3-PR-09
18
10
临床标本的保存操作程序
ABCD-3-PR-10
21
11
标本的采集运送接收程序
ABCD-3-PR-11
22
12
PCR生物防护措施
ABCD-3-PR-12
24
13
PCR实验室化学试剂配
ABCD-3-PR-13
25
14
PCR实验室记录管理制度
ABCD-3-PR-14
26
15
PCR应急处理程序
ABCD-3-PR-15
28
16
PCR试剂的质检标准操作程序
ABCD-3-PR-16
30
17
PCR消耗品进购质检贮存程序
ABCD-3-PR-17
31
18
PCR室内质量控制操作程序
ABCD-3-PR-18
33
19
PCR室间质量控制操作程序
ABCD-3-PR-19
35
20
PCR温度校准标准操作程序
ABCD-3-PR-20
36
21
核酸扩增荧光仪操作维护规程
ABCD-3-PR-21
37
22
干式恒温器操作维护规程
ABCD-3-PR-22
43
23
离心机操作维护规程
ABCD-3-PR-23
45
24
冰箱操作维护规程
ABCD-3-PR-24
47
25
生物安全柜操作维护规程
ABCD-3-PR-25
49
26
移液器操作维护规程
ABCD-3-PR-26
51
27
沙眼衣原体核酸扩增荧光检测
ABCD-3-PR-27
54
28
乙肝病毒核酸扩增荧光检测
ABCD-3-PR-28
56
29
丙肝病毒核酸扩增荧光检测
ABCD-3-PR-29
58
30
结核杆菌核酸扩增荧光检测
ABCD-3-PR-30
60
31
高速冷冻离心机操作维护规程
ABCD-3-PR-31
62
附录
表格
检验科基因检测实验室平面图
ABCD/001
实验室主要负责人简历表
ABCD/002
PCR实验室工作人员一览表
ABCD/003
PCR扩增接收标本记录表
ABCD/004
拒收标本记录本
ABCD/005
标本超低温保存记录表
ABCD/006
PCR试剂购买记录表
ABCD/007
试剂验收记录表
ABCD/008
PCR室特殊耗材验收记录表
ABCD/009
普通耗材验收记录表
ABCD/010
室间质评记录表
ABCD/011
PCR室内质控记录表
ABCD/012
室内质控图
ABCD/013
PCR实验室环境温湿度记录表
ABCD/014
冰箱温度质控图
ABCD/015
仪器使用记录表
ABCD/016
仪器设备维护和校准记录表
ABCD/017
紫外消毒车消毒记录表
ABCD/018
应急处理登记表
ABCD/019
PCR废血标本处理交接表
ABCD/020
垃圾处理记录表
ABCD/021
实验室清洁消毒记录表
ABCD/022
PCR检验报告单
ABCD/023
耗材进购记录表
ABCD/024
试剂耗材供应商一览表
ABCD/025
修订页
序号
文件编号
页码
需更改的内容
更改内容
批准人
批准日期
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
PCR实验室的设置及管理
1．目的：
建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。
2．适用范围：
本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3．负责人：
4．细则：
4．1分子诊断室为检验科下设的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作。
4．2本实验室采用实时荧光定量PCR技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：
试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区）、扩增分析区（第三区）。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。
各区标签颜色：
红色（第一区）、白色或绿色（第二区）、蓝色（第三区）；专用工作服：
粉红色（第一区）、白色（第二区）、蓝色（第三区）。
标本的接收则在检验科标本接收处进行。
4．3各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。
4．4各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP文件。
4．5严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区。
4．6非本实验室工作人员，未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。
4．7实验完毕后做好清洁消毒工作。
5.本文涉及以下图表：
1.实验室设计平面图
PCR实验室工作制度
1．目的：
保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。
2．适用范围：
所有本实验室人员。
3．负责人：
4．细则：
4．1本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作，不得进行其它实验操作。
4．2各区的用品不得混用。
4．3在各区的实验操作过程中，操作者必须戴手套和帽子，严格按照操作规程。
4．4试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作（见相关SOP文件）。
4．5标本处理区只能进行临床标本的保存，核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成（见相关SOP文件）。
4．6扩增分析区只能进行DNA或cDNA的扩增、实时荧光PCR扩增产物的分析（见相关SOP文件）。
4．7进行实验时严格执行本实验室的各项操作规程，及时做好各种操作记录，力求准确、可靠。
实验完毕，做好清洁、整理及分析统计等工作。
4．8室内仪器由专人负责，未经许可，不得随意使用或挪用；爱护使用仪器，定期进行保养与维修。
4．9爱护医院财产，注意安全；离开实验室前应关好门窗，检查水、电等。
PCR实验室内务管理制度
1．目的：
保证实验室日常内务管理及清洁工作顺利进行。
2．适用范围：
实验室相关人员及医院相关清洁工人。
3．负责人：
4．细则：
4．1非本室工作人员未经允许不得进入实验室。
4．2各区的用品不得混用。
4．3实验人员要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、早退。
4．4进入实验室的工作人员必须遵守实验室的单一流向的规定，禁止逆向走动。
4．5所有仪器（如PCR扩增仪）须有专人负责，并有使用维护记录；实验人员必须熟悉仪器性能后方允许操作，并严格遵守操作规程。
4．6所有试剂进购、配制、质检、使用均要有记录，未经允许不得随意带出本实验室。
4．7每天了解仪器运转情况及试剂使用情况，确保仪器整洁安全，试剂合格使用。
4．8各区的各种清洁消毒均应有记录，工作衣消毒时注意各区应分开进行处理。
4．9注意保持实验室卫生整洁，严禁在室内抽烟、吃零食，非实验操作人员应尽量少入。
4.10下班前检查门、窗、水、电，节假日应指定人员负责检查实验室的仪器、设备。
PCR实验室人员的配置及管理
1．目的：
保证实验室有足够数量的合格的具备开展该类实验能力的实验人员。
2．适用范围：
适用于实验室人员配置、管理、培训及考核。
3．负责人：
4．细则：
4．1人员要求
4．1．1本实验室工作人员应为医学检验专业或相关专业毕业，具有中级以上技术职称或专科以上学历。
4．1．2实验室工作人员应参加卫生部或省临检中心举办的PCR技术培训，并取得合格证。
4．1．3对于新进入本室的人员，如尚未取得PCR技术培训合格证，应在实验室有培训合格证的上级技术人员的指导下进行实验工作，实验报告由有资格人员出具，并应在最短的时间内取得上岗培训合格证。
4．2人员配置
4．2．1实验室应根据工作需要配备足够的工作人员，目前实验室有主管技师2人、技师1人，3人都已获得培训合格证，视工作量的增加和业务发展需要，会适当增加工作人员。
4．2．2各级技术人员履行相应的工作职责。
4．3人员培训及考核
4．3．1实验室负责人或负责人指定人员参加每年卫生部PCR室间质评总结会。
4．3．2实验室工作人员每1～2年至少参加1次PCR技术的省级或国家级继续教育项目，参加相关学术交流会议。
4．3．3安排未取得上岗培训合格证的工作人员在合适的时间内参加技术培训。
4．3．4科室不定期组织实验室内部实验人员学习、更新核酸扩增方面的相关知识，提升自身的理论学习水平。
特别是在标本接收区采血、接收标本的人员，需定期对其进行有关核酸扩增技术，标本采集、保存、运输等知识的培训。
一些科室的送检标本由该科室的人员送到标本接收区，对这些临床医护人员也要定期进行有关核酸扩增技术，标本采集、保存、运输等知识的培训。
4．3．5本实验室工作人员每年进行考核一次,考核内容:
a）日常工作质量
b）室内质控测评
c）室间质控测评
d）在抱怨处理中的表现
4．3．6本实验室工作人员实行严格奖惩制度,有下列表现者可受奖:
a）工作质量高,质控测评成绩优秀者
b）有科研能力,并有一定数量和质量的论文发表
c）有独创性工作成果,经鉴定认可者
d）受到有关部门或群众嘉奖者
有下列情况者将受到惩处:
a）工作质量问题较多，质控测评成绩不合格；
b）不遵守规章制度并造成一定影响；
c）不求上进。
4．3．7本实验室工作人员奖惩方法分精神及物质两类,经实验室上报医院及有关部门批准后执行。
4．3．8本实验室工作人员均建立业绩档案,实行能进能出制度,不断吸收高质量人员,加强培训和提高,对于不适合本室工作的人员要及时调离。
4．4人员管理
4．4．1实验室建立所有工作人员的技术档案，包括：
学历、任职资格、发表论文、研究成果、培训等相关材料复印件。
4．4．2技术档案分文本档案和电子档案，文本档案每年更新1次，电子档案随时更新。
5.本文涉及以下表格
实验室主要负责人简历表
PCR实验室工作人员一览表
培训申请表
年度培训计划表
培训记录表
员工培训履历表
人员档案卡
PCR实验室清洁程序
1．目的：
保证实验室环境的整洁，防止污染。
2．适用范围：
适于实验室工作环境、实验台面、工作服、移液器等的清洁消毒工作。
3．负责人：
操作人：
4．细则：
4．1实验室地面必须平整、干净，通道要利于通行，没有无用的物品阻碍。
4．2合理规划实验室内物品，做到摆放整齐、有序，无用的或使用效率低的物品放置到储存处，常用的物品要容易寻找到。
4．3抽屉、柜子、文件类物品要作好标记，以方便识别。
4．4实验结束后用2%戊二醛对台面进行清洁，并用移动紫外灯进行消毒。
4．5每天对使用过的移液器用75%酒精进行擦拭。
每周1次对移液器咀进行75%酒精浸泡15分钟左右，若使用过程中发生污染应随时浸泡处理。
4．6实验过程中如发生标本或试剂外溅，应立即用2%戊二醛滴上，滤纸盖上半小时，然后用酒精擦洗，并用移动紫外灯消毒。
4．7每天实验前开启各区的通风系统，各区实验结束后，分别打开传递窗紫外灯、移动紫外灯（对实验台面消毒）、天花板紫外灯消毒实验室，每次开启30～60分钟。
4．8待紫外灯消毒时间足够后，依次关闭各区紫外灯并记录。
4．9依次清洁三个区的实验台面和地面，各区清洁消毒工具均专用，不可混用，注意按照单一方向流程的原则来进行清洁。
4．10处理好各区废弃物，交医院集中处理。
4．11每周将工作服交院洗衣房洗涤消毒，不同实验区的工作服隔开洗涤。
5.本文涉及以下表格
实验室清洁消毒记录表
垃圾处理记录表
PCR标本唯一标识编号规则
1．目的：
保证标本编号的唯一性，也是准确发放报告的基础。
2．适用范围：
使用核酸扩增荧光检测实验室所开展的四种检测项目：
乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、结核杆菌、沙眼衣原体。
3．负责人：
操作人：
4．程序：
4．1按检测日期分类标记
根据标本送检的日期，每天的标本对应标记一种唯一的代号。
如当天为2005年3月1日，则编为050301。
4．2按检测类型分类标记
根据检测项目的不同，每种检测项目对应标记一种唯一的代号。
如乙型肝炎病毒标记为B，丙型肝炎病毒标记为HC，结核杆菌标记为T，沙眼衣原体为C。
4．3按验单接收顺序编号
在同种检测类型的验单中，按验单顺序编号。
如第一个检测乙型肝炎病毒的验单编为B01，第二个检测乙型肝炎病毒的验单编为B02，第三个检测结核的验单编为B03等。
4．4特殊标本的编号
如有特殊情况，应在标记前面增加特异字母区别开，如住院的单和门诊的单、其它医院送来的单和本医院的单要区分开等。
4．5编号步骤
a）对当天送来的标本，根据编号的基本原则编号，每个样本的每个检测项目对应一个唯一的编号（如050301T04）。
b）用笔在每张检验申请单和对应的样品管上作好相同的标记。
c）做好标本的接收记录，每个样本的记录都应包括以下信息：
接收时间、医院、科室、送检医生、患者姓名、性别、年龄、标本类别、标本状态、送标本者、接收人、检验单号、标本唯一统编号等。
d）处理好样品、点样后，将反应管放入扩增仪上开始扩增。
f）扩增得到结果后，先在统计簿上填入结果，作好记录，再一一把实验结果填入相应申请单。
g）发放检验报告单。
5.本文涉及以下图表：
PCR扩增接收标本记录表
PCR基因扩增实验室的要求
1．目的：
规定在各区内所进行的工作及其操作。
2．适用范围：
所有在本区内进行的工作。
3．负责人：
操作人：
4．程序：
实验室分四区:
标本接收区；试剂贮存、准备区；标本制备区；扩增区。
进入各区严格按照单一方向进行，即试剂贮存、准备区——标本接收区——标本制备区——扩增区。
各区及其设备、物品必须有明确的标记，严禁混用。
进入PCR实验室的工作人员（含卫生员），都必须遵守实验室的规则，尤其严格遵守进入PCR实验室的唯一流向。
不可进入PCR扩增后区打扫卫生，再返回扩增前区工作。
防止非本室工作人员串岗，进入本室。
尤其不得为找人，而逆向误入PCR实验室。
总则
（1）PCR实验室工作人员应具备医学检验、微生物检验基本知识，大专以上学历，并受过PCR实验的基础知识和技能培训。
（2）PCR实验室分试剂准备，样本准备，PCR扩增和产物检测四个室，各室的实验物品（含加样器，试管架，吸头，记录纸，笔等），不得混用，须贴上标签予以区别。
（3）实验室技术人员必须严格按照PCR实验室操作程序进行，包括实验室擦洗。
台面消毒，离心管，吸头的无菌灭活准备，仪器使用和废弃物处理等。
（4）进入实验室的工作人员必须更换各室不同的工作服（含帽和鞋），勤换洗工作服，以及遵守实验室的唯一流向的规定，严禁反向流动。
（5）进入PCR实验室后区的物品不许带进PCR实验室前区。
每天实验开始前，必须清洁地面和消毒实验室前区。
实验结束应紫外线消毒实验台面，产物分析室紫外灯最好彻夜开启，排风扇应昼夜工作。
每天下班前处理好废物，应关好水、电、煤气和门窗。
（6）定期校准和维修PCR仪、酶标仪及离心机、水浴箱等仪器设备。
（7）实验室内不得饮食、吸烟。
4.1标本接收区
4.1.1实验人员进入该区须穿本区白色工作服，接收标本须戴一次性手套。
4.1.2记录实验室干、湿度，绘制冰箱温度图。
使用带有本区标识的记录本、纸和笔，每项记录，书写工整详细。
4.1.3对送检的标本实行双签制度，并仔细检查是否符合检测要求，对有不符合要求的标本及时通知相关科室重新采样，并作记录，每份标本需给出唯一性编号。
4.1.4本区所有废弃物分类装入垃圾袋，封好，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，将垃圾带出实验室。
4.1.5每次实验结束后，清洁实验台及地面打开紫外灯消毒30分钟。
记录紫外灯使用情况。
4.2试剂贮存、准备区
4.2.5使用带有本区标识的记录本、纸和笔，每项记录，书写工整详细。
4.2.6准备好的试剂送入下一区，还原实验台面，将本区所有废弃物分类装入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，将本区垃圾带出实验室。
4.2.7白色工作服留在本区。
4.2.8本区维持相对正压状态（开启缓冲区的排气扇）。
实验结束后，清洁实验台及地面打开紫外灯消毒30分钟。
4.3标本制备区
4.3.1实验人员进入该区须在缓冲区更换专用蓝色工作服及拖鞋。
实验中须使用一次性帽子，戴手套，手套在实验过程中疑有污染应立即更换。
4.3.2将传入本区的试剂放入冰箱冷冻室试剂存放专区暂存。
记录实验室干、湿度，绘制冰箱温度图。
4.3.3将冰箱内二周前的标本密封丢入垃圾筐，然后记录标本的保存情况。
4.3.4使用带有本区标识的记录本、纸和笔，每项记录，书写工整详细。
4.3.5按试剂盒说明书对标本进行处理，将处理好的标本在超净工作台内加样，记录标本的处理过程。
4.3.6将加样后的试剂传送下一区，还原实验台面，关闭所有仪器，记录仪器使用时间和运行状态。
4.3.7使用过的离心管、吸头须置于盛有10％84液的废液缸中，实验结束后方丢入垃圾袋，患者样品应按有生物传染性危险品对待。
4.3.8将本区所有废弃物分类装入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，将垃圾带出本区。
4.3.9将蓝色工作服留在本区。
4.3.10本区应避免不必要的走动，同时维持相对正压状态，实验结束后，清洁实验台及地面打开紫外灯消毒30分钟。
4.4扩增产物检测区
4.4.1实验人员进入该区须在缓冲区更换专用粉色工作服及拖鞋。
4.4.2记录实验室干、湿度，绘制冰箱温度图。
4.4.3使用带有本区标识的记录本、纸和笔，每项记录，书写工整详细。
4.4.4将传入本区加样后的试剂上机扩增。
4.4.5扩增完成后，记录检测结果，及时发放报告单，记录仪器使用时间和运行状态。
4.4.6将本区所有废弃物分类装入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，然后将垃圾带出实验室。
4.4.7将粉色工作服留在本室再离开实验室
4.4.8严禁本区物品带至其他区，该区需维持负压状态，排气扇24小时排气，实验结束后清洁该区打开紫外灯照射，最好整夜消毒，记录紫外灯使用情况。
5.本文涉及以下表格
PCR实验室环境温湿度记录表
冰箱温度质控图
实验室清洁消毒记录表
垃圾处理记录表
紫外消毒车消毒记录表
PCR废弃物的处理程序
1．目的：
保证实验室、实验人员和外部环境的安全。
2．适用范围：
核酸扩增荧光检测实验室常用化学试剂（NaOH、EDTA、乙醇、生理盐水等）、实验室废弃物的处理；
3．负责人：
操作人：
4．细则：
4.1科室职责应对本室工作人员讲明本程序在预防交叉、实验室污染及切断传播途径中的重要性，并要求严格执行。
4.2实验室所有垃圾，装入专用污物袋内，各区备有：
生活垃圾袋（黑色）及生物污染垃圾袋（黄色）。
使用过的一次性消耗品（如试管、吸头、离心管、等），先放入10%次氯酸钠溶液中浸泡2～4小时后，再放入黄色垃圾袋内，使用过的手套、鞋套等直接放入黄色垃圾袋内交医院集中处理。
4.3夹取标本的工具，如钳、镊、接种环、吸管等，用后均应消毒清洁，进行微生物检验时，应重新灭菌，金属工具可烧灼灭菌或消毒液浸泡；玻璃制品干热或压力蒸汽灭菌。
4.4一次性塑料痰盂，用2%戊二醛液浸泡2～4小时后，放入黄色垃圾袋内交医院集中处理。
4.5废弃标本如血、尿、胸水、腹水、脑脊液、唾液、胃液、肠液、关节腔液等用10%的84液浸泡2～4小时后，交医院集中处理。
4.6盛标本的容器，若为一次性使用的纸质容器及其外面包被的废纸，放入污物袋里交医院处理；对可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器，煮沸15分钟或加入10%次氯酸钠溶液浸泡2～4小时，消毒液每日更换，消毒后用洗涤剂及流水刷洗，沥干，用于微生物培养采样者，用压力蒸汽灭菌后备用。
4.7废弃标本及其容器装入黄色垃圾袋内、封闭，交医院污物处理中心处理。
4.8日常生活垃圾如纸屑等按一般垃圾交医院处理。
5.本文涉及以下表格
PCR废血标本处理交接表
基因扩增检测实验及结果分析
1、目的：
保证扩增及结果分析的标准化、规范化。
2．适用范围：
适用于本室使用的普通离心机。
3．负责人：
肖静操作人：
胡可存蒋艺勤
4、标准程序：
4.1基因扩增检测标准程序：
扩增反应前须先在样本输入模板上按照事先排好的标本位置进行设置。
每次实验除待检标本，还需包括：
阴性对照、阳性对照、室内质控品各一份，一组阳性标准品（4个梯度108、106、105、104）。
4.1.1打开电脑电源开关，进入WindowsNT界面。
4.1.2接着打开PCR仪电源开关，预热5分钟。
4.1.3双击电脑桌面的ABIPrism5700SDSSoftware图标进入程序设置界面。
4.1.4单击“文件”菜单中的“新建”命令，（或单击工具栏中的“新建”按扭）。
在测定、容器和模板中做相应
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