实验室常用技术参数资料精.docx
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实验室常用技术参数资料精
实验室常用技术参数资料
一、核酸及蛋白质常用数据
1．核苷三磷酸的物理常数
化合物
分子量
λmax（pH7.0）
1摩尔溶液（pH7.0）中λmax时的最大吸收值
OD280/OD260
ATP
507
259
15400
0.15
CTP
483
271
9000
0.97
GTP
523
253
13700
0.66
UTP
484
262
10000
0.38
dATP
494
259
15200
0.15
dCTP
467
271
9300
0.98
dGTP
507
253
13700
0.66
dTTP
482
267
9600
0.71
2．常用核酸的长度与分子量
核酸
核苷酸数
分子量
λDNA
48502（双链环状）
3.0×107
pBR322
4363（双链）
2.8×106
28SrRNA
4800
1.6×106
23SrRNA
3700
1.2×106
18SrRNA
1900
6.1×105
19SrRNA
1700
5.5×105
5SrRNA
120
3.6×104
tRNA（大肠杆菌）
75
2.5×104
3．常用核酸蛋白换算数据
（1）重量换算
1μg=10-6g 1pg=10-12g
1ng=10-9g 1fg=10-15g
（2）分光光度换算：
1A260双链DNA=50μg/ml
1A260单链DNA=30μg/ml
1A260单链RNA=40μg/ml
（3）DNA摩尔换算：
1μg100bpDNA=1.52pmol=3.03pmol末端
1μgpBR322DNA=0.36pmol
1pmol1000bpDNA=0.66μg
1pmolpBR322=2.8μg
1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿
1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿
1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿
（4）蛋白摩尔换算：
100pmol分子量100，000蛋白质=10μg
100pmol分子量50，000蛋白质=5μg
100pmol分子量10，000蛋白质=1μg
氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿
（5）蛋白质/DNA换算：
1kbDNA=333个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质
10，000MW蛋白质=270bpDNA
30，000MW蛋白质=810bpDNA
50，000MW蛋白质=1.35kb
100，000MW蛋白质=2.7kbDNA
4．常用蛋白质分子量标准参照物
（1）高分子量标准参照
（2）中分子量标准参照
（3）低分子量标准参照
肌球蛋白
分子量
磷酸化酶B
97，400
碳酸酐酶
31，00
肌球蛋白
212，000
牛血清白蛋白
66，200
大豆脻蛋白酶
21，500
β-半乳糖甘酶B
116，000
谷氨酶脱氢酶
55，000
抑制剂
磷酸化酶B
97，400
卵白蛋白
42，700
马心肌球蛋白
16，900
牛血清白蛋白
66，200
醛缩酶
40，000
溶菌酶
14，400
过氧化氢酶`
57，000
碳酸酐酶
31，000
肌球蛋白（F1）
8，100
醛缩酶
40，000
大豆脻蛋白酶
21，500
肌球蛋白（F2）
6，200
抑制剂
肌球蛋白（F3）
2，500
溶菌酶
14，400
5．常用DNA分子量标准参照物
λDNA/HindⅢ
λDNA/EcoRⅠ
λ/HindⅢ+EcoRⅠ
pBR322/HaeⅢ
23130
21226
21227
587
123
9416
7421
5148
405
104
6557
5804
4973
504
89
4361
5643
4268
458
80
2322
4843
3530
434
64
2027
3530
2027
267
57
564
1904
234
51
125
1584
213
21
1375
192
18
974
184
11
831
124
7
564
125
续上表
pBR322/HinfⅠ
φχ174/HinfⅠ
φχ174/HaeⅢ
φχ174/TapⅠ
1631
726
140
1353
2914
517
713
118
1078
1175
506
553
100
872
404
396
500
82
603
327
344
417
66
310
231
298
413
48
281
141
221
311
42
271
87
220
249
40
234
54
154
200
24
194
33
75
151
118
20
72
二、常用缓冲液
1．分子克隆常用缓冲液
2．磷酸缓冲液
（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※
pH
1mol/LK2HPO4（ml）
1mol/LKH2PO4（ml）
5.8
8.5
91.5
6.0
13.2
86.8
6.2
19.2
80.8
6.4
27.8
72.2
6.6
38.1
61.9
6.8
49.7
50.3
7.0
61.5
38.5
7.2
71.7
28.3
7.4
80.2
19.8
7.6
86.6
13.4
7.8
90.8
9.2
8.0
94.0
6.2
（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※
pH
1mol/LNa2HPO4（ml）
1mol/LNaH2PO4（ml）
5.8
7.9
92.1
6.0
12.0
88.0
6.2
17.8
82.2
6.4
25.5
74.5
6.6
35.2
64.8
6.8
46.3
53.7
7.0
57.7
42.3
7.2
68.4
31.6
7.4
77.4
22.6
7.6
84.5
15.5
7.8
89.6
10.4
8.0
93.2
6.8
※:
用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值：
pH=pK’+1g（[质子受体]/[质子供体]）
在此，pK’=6.86（25℃）。
3．电泳缓冲液
测序凝胶加样缓冲液
98%去离子甲酰胺
10mol/LEDTA（pH8.0）
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚蓝
甲酰胺：
许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。
不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与DowexXG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。
常用的电泳缓冲液
缓冲液
使用液
浓贮存液（每升）
Tris-乙酸（TAE）
1×：
0.04mol/LTris-乙酸
50×：
242gTris碱
0.001mol/LEDTA
57.1ml冰乙酸
100ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）
Tris-磷酸（TPE）
1×:
0.09mol/LTris-磷酸
10×:
10gTris碱
0.002mol/LEDTA
15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）
40ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）
Tris-硼酸（TBE）a
0.5×0.045mol/LTris-硼酸
5×：
54gTris碱
0.001mol/LEDTA
27.5硼酸
20ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）
碱性缓冲液b
1×:
50mmol/LNaOH
1×:
5ml10mol/LNaOH
1mmol/LEDTA
2ml0.5mmol/LEDTA（pH8.0）
Tris-甘氨酸c
1×:
25mmol/LTris
5×:
15.1gTris
250mmol/L甘氨酸
94g苷氨酸（电泳级）（pH8.3）
0.1%SDS
50ml10%SDS（电泳级）
说明：
①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：
5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。
但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。
目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：
10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2×SDS凝胶加样缓冲液：
100mmol/LTris·HCl（6.8）
200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2%溴酚蓝
20%甘油
不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。
4．凝胶加样缓冲液
缓冲液类型
6×缓冲液
贮存温度
Ⅰ
0.25%溴酚蓝
4℃
0.25%二甲苯青FF
40%（W/V）蔗糖水溶液
Ⅱ
0.25溴酚蓝
室温
0.25%二甲苯青FF
15%聚蔗糖（Ficoll400）
Ⅲ
0.25%溴酚蓝
4℃
0.25%二甲苯青FF
30%甘油水溶液
Ⅳ
0.25%溴酚蓝
4℃
40%（W/V）蔗糖水溶液
碱性加样缓冲液:
300mmol/LNaOH
6mmol/LEDTA
Ⅴ
18%聚蔗糖（Ficoll400）
4℃
0.15%溴甲酚绿
0.25%二甲苯青FF
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：
增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。
溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。
以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。
在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。
但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。
5．各种pH值的Tris缓冲液的配制
各种pH值的Tris缓冲液的配制
所需pH值（25℃）
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