牛病毒性腹泻病毒doc.docx

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牛病毒性腹泻病毒doc

牛病毒性腹泻病毒免疫机理研究进展

摘要：

本文综述了牛病毒性腹泻病毒的生物学特性、生理生化特性及其诱导的细胞免疫、体液免疫研究进展情况,并对牛病毒性腹泻病毒免疫机理做了一定的探讨,对研究方向进行了展望.

鸡Perilipin1抗血清制备及组织表达特性分析

摘要：

通过制备鸡脂滴包被蛋白（Perilipin1）的抗血清,分析鸡Perilipin1的组织表达特性并推测其在脂肪组织脂类代谢过程中发挥的功能.利用RT-PCR的方法扩增鸡Perilipin1基因,并将其构建到含有His标签的表达载体pET-28a上.将阳性重组表达质粒pET-28a/Perilipin1导入大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下产生His/Perilipin1融合蛋白,对产生的His/Perilipin1蛋白包涵体进行复性处理,复性后以其为免疫原制备鸡Perilipin1多克隆抗血清.通过ELISA和Westernblot的方法检测抗血清的效价及特异性,并利用此抗血清分析鸡Perilipin1在各种组织中的表达特性以及比较其在高、低脂系公鸡间的表达差异.ELISA和Westernblot结果表明,本试验获得了效价高、特异性强的鸡Perilipin1抗血清,同时Westernblot检测Perilipin1的组织表达特性结果表明,Perilipin1仅在鸡脂肪组织中表达,而在肝脏、十二指肠、胸肌、腿肌、肌胃、心脏、脾脏、肾脏等组织中未检测到表达信号;Perilipin1在肉鸡高脂系脂肪组织中的表达量显著高于低脂系中的表达量（P＜0.05）.结果表明,Perilipin1的表达与肉鸡腹部脂肪的沉积具有密切的关系.

牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

摘要：

根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立了检测BVDV的RT-PCR方法.通过对该方法的特异性、敏感性和重复性进行试验,结果显示,该方法可从BVDV标准毒株OregonC24V中扩增出471bp的特异性片段,而对猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒、MDBK正常细胞的扩增结果均为阴性.经对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达10-1TCIDso/mL应用该方法对临床腹泻病牛各脏器样品进行检测,结果比病毒分离方法更为敏感,操作简便.表明建立的RT-PCR方法具有特异、灵敏、高效、快速的特点,可用于BVDV的临床

牛病毒性腹泻病毒套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

doi：

摘要：

根据GenBank公布的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）全基因组序列,选择保守性比较高的5＇非编码区,利用Oli-go6.0软件设计了2对特异性引物,建立了检测BVDV的套式RT-PCR方法。

结果表明,该方法重复性好、特异性强、敏感性高,可以准确快速检测出极低含量的BVDV,极大地提高了常规RT-PCR检测方法的特异性和敏感性。

临床初步应用表明,该方法可用于动物与疫苗生物制品原辅料BVDV的快速低含量检测。

牛病毒性腹泻病毒的分子生物学研究进展

doi：

摘要：

牛病毒性腹泻病毒是黄病毒科瘟病毒属的代表种,主要感染牛并引发疾病,造成严重的经济损失.自该病毒发现至今,已有60余年研究历史,随着生物学理论及技术不断发展,特别是反向遗传技术以及蛋白组学在病毒研究领域的应用,人们对该病毒产生了一些新的认识.论文从牛病毒性腹泻病毒的病毒粒子结构组成及功能、病毒复制周期及蛋白裂解过程、细胞损伤及免疫逃逸机制三个方面阐述了近几年牛病毒性腹泻病毒分子生物学研究的进展,重点讨论了病毒复制周期、多聚蛋白裂解、致细胞病变效应和免疫逃逸机制.

牛病毒性腹泻病实验室诊断方法的研究进展

摘要：

牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒引起的,以出现多症状、持续性感染和免疫抑制为主要特征,呈世界性广泛流行.主要对用于该病的痛原学诊断、血清学诊断和分子生物学诊断等实验室诊断方法进行综述,以期为建立更加快速、有效的诊断方法提供参考.

牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测

doi：

摘要：

采用Svanova公司牛病毒性腹泻病毒血清抗体ELISA抗体检测试剂盒对采自新疆10个不同地区的875份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测,共检出抗体阳性血清759份,最高阳性率为100％,最低为55.0％,平均为86.7％.检测结果表明该病已在新疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律.根据ELISA检测结果,从中选择15份血清用病毒中和试验进行检测,结果显示,所采用的ELISA检测方法具有较好的敏感性

牛病毒性腹泻病毒的病原学与诊治

摘要：

牛病毒性腹泻病毒是主要侵害牛,尤其是犊牛的一种呈世界性分布的黄病毒科瘟病毒属的病毒,引起的急性疾病称为牛病毒性腹泻,引起的慢性持续性感染称为黏膜病,严重危害养牛业的健康发展.对该病毒作一介绍,以加强认识,做好防范,减少其危害.

牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定

摘要：

[目的]为了解牛病毒性腹泻/黏膜病在新疆的流行现状,对疑似该病病料进行地方毒株的分离,并对其进行鉴定.[方法]将采自新疆不同地区疑似牛病毒性腹泻的病料接种MDBK细胞,并盲传2～4代;对分离株进行毒力测定及中和试验,应用RT-PCR方法扩增分离株的5'UTR基因片段并克隆测序分析.[结果]分离到的8株病毒可发生细胞病变,在MDBK细胞上的TCID50为103～106.毒株血清中和实验结果,RT-PCR反应结果,克隆后重组质粒经BamHI、HindIII双酶切鉴定、重组质粒PCR鉴定结果均得到预计扩增片段.重组质粒测序结果与GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒NADL株序列同源性为82.0%～94.8%.[结论]证实所分离到的病毒为BVDV,命名为B-S-1、B-S-2、B-S-3、B-S-4、B-S-5、B-S-6、B-G-1和B-G-2.

牛病毒性腹泻病毒生物型转化分子机制的研究进展

doi：

摘要：

从病毒基因与宿主细胞基因的重组、病毒基因的复制与重排、病毒基因的重复复制和序列插入、病毒基因的缺失和点突变几个方面阐述了牛病毒性腹泻病毒（BVDV）由非致细胞病变型（NCP）向致细胞病变型（CP）转化的分子变异机制.总结了前人对NCP型向CP型BVDV转化研究的结果,归纳了5种生物型转化形式,揭示了BVDV具有高变异性.

抗牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的研制

摘要：

将含有牛病毒性腹泻病毒1型（BVDV1）囊膜糖蛋白E2编码基因的真核表达质粒pEC143免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组E2蛋白纯化产物为检测抗原,经间接ELISA法筛选和3次有限稀释法克隆,得到1株能稳定分泌抗BVDV1和BVDV2单克隆抗体的杂交瘤细胞株.该3D8株单抗能识别BVDV1标准毒株（NADL、OregonC24V）、BVDV2标准毒株（890、104）、2株BVDV1分离株和3株BVDV2分离株,而不能识别牛轮状病毒、牛疱疹病毒1型,显示出良好的特异性.阳性杂交瘤细胞的上清液、腹水ELISA抗体效价分别为2~9和10×2~7,为IgM亚类.其单克隆抗体杂交瘤细胞株的获得,为建立单抗介导的检测BVDV1和BVDV2抗原和抗体的血清学方法和实现标准化诊断奠定基础.

牛病毒性腹泻病毒地方株的分离与鉴定

doi：

摘要：

从河南省不同地区规模化肉牛场牛病毒性腹泻（BVD）疑似病例中采集病料,将处理好的6份病料接种MDBK细胞,并盲传4代,得到了2株可产生细胞病变的病毒.2株病毒的TCID50分别为10-5.59和10-5.51;琼脂扩散试验表明,2株病毒均能与牛病毒性腹泻病毒（BVDV）OregonC24标准阳性血清反应,出现沉淀线;中和试验表明,2株病毒均能被BVDV标准阳性血清中和,中和指数分别为103.30和103.16;电镜观察到圆形,直径为40～60nm,有囊膜,囊膜表面有突起的病毒粒子,与BVDV颗粒基本一致.因此,确定分离的2株病毒均为BVDV,分别将其命名为HN-1株和HN-2株.

牛病毒性腹泻病毒蛋白特性的研究进展

doi：

摘要：

作者对牛病毒性腹泻病毒（BoyineViralDiarrheaVirus,BVDV）的生物学特性、基因组结构特征及编码蛋白的合成与功能的研究进展进行了综述.

牛病毒性腹泻病毒及其进化研究进展

doi：

摘要：

牛病毒性腹泻病毒（Boyineviraldiarrhoeavirus,BVDV）在我国发现有20多年,而在世界范围来讲已有近100年的历史.由于牛病毒性腹泻病毒造成奶牛生产性能下降、繁殖障碍、持续感染等,是导致集约化奶牛场严重亏损的重要原因.且牛病毒性腹泻导致的黏膜病致死率几乎100%,已经严重阻碍养牛业的发展,但目前我国对牛病毒性腹泻还没有好的防控措施.文章对牛病毒性腹泻的发生历史总结,便于在牛病毒性腹泻病毒的诊断和预防中参考.

牛病毒性腹泻病毒基因组结构与蛋白功能研究进展

doi：

摘要：

牛病毒性腹泻病毒为黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）的代表种,这个属的成员中还包括羊边界病毒（BDV）和猪瘟病毒（CSFV）.病毒基因组为单股正链RNA.论文就牛病毒性腹泻病毒已定位的4种结构蛋白、8种非结构蛋白以及3'和5'非翻译区的基因结构特征及其编码蛋白的合成与功能研究进行了综述,为牛病毒性腹泻的防控和疫苗研制提供参考.

牛病毒性腹泻病的危害及防制

摘要：

牛病毒性腹泻-黏膜病（BVD/MD）,又称牛病毒性腹泻（BVD）或牛黏膜病（MD）,是由牛病毒性腹泻病毒引起的一种极为复杂、呈多临床类型表现的疾病。

1946年由Olafson等在纽约首次发现。

本病在世界各国普遍存在,尤其养牛业发达的地区,这

牛病毒性腹泻病毒研究进展

摘要：

牛病毒性腹泻病毒及其防控

摘要：

自1946年人类首次发现和报道牛病毒性腹泻病毒（BVDV）以来,该病毒已被人们认知60多年,在过去的60多年里,经过科研人员和兽医工作者的不懈努力,人类对该病毒的认识不断深入.现已证实,BVDV属于黄病毒科（Flaviviridae）,瘟病毒属（Pestivirus）成员,病毒能引起多种动物、多个系统发生疾病,病毒感染牛引起牛病毒性腹泻-黏膜病（BVD/MD）,该病在世界范围流行,给世界养牛业造成了不可估量的经济损失.

鸡SREBP1基因抗血清制备及组织表达特性分析

doi：

摘要：

目的:

制备鸡类固醇调节元件结合蛋白1（SREBP1）的多克隆抗血清,并分析其组织表达特性.方法:

利用DNAStar软件对鸡SREBP1入核部分蛋白进行分析,预测其主要抗原决定簇区域;利用RT-PCR的方法扩增编码鸡SREBPl主要抗原决定簇的基因片段（832-1302bp）,构建原核表达载体pGEX-4T/SREBP1;诱导重组蛋白GST/SREBP1表达并纯化后,以其为免疫原制备鸡SREBP1的多克隆抗血清;通过ELISA和Westernblot的方法检测抗血清的效价和特异性,并利用此抗血清分析SREBP1基因在肉鸡组织中的表达特性.结果:

ELISA测定抗体效价为1:

102400,Westernblot结果显示抗体具有较高的特异性;SREBP1基因在肉鸡腹部脂肪组织和心脏组织中有较高表达,在肝脏、肌胃、十二指肠、脾脏、肾脏等组织表达量较低,在胸肌和腿肌中没有检测到信号;SREBP1基因在高脂系公鸡腹部脂肪组织中的表达量显著高于低脂系公鸡腹部脂肪组织的表达量（P<0.05）.结论:

本研究制备的鸡SREBP1的多克隆抗血清效价高、特异性强.SREBP1在肉鸡腹部脂肪组织高量表达.与低脂系公鸡相比,SREBP1在高脂系公鸡腹部脂肪组织的表达量较高.

鸡Perilipin1抗血清制备及组织表达特性分析

doi：

摘要：

人14-3-3β蛋白的原核表达、抗血清制备及真核表达载体的构建doi：

10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2009.11.001

摘要：

目的纯化原核表达的14-3-3β（YWHAB）重组蛋白并制备多抗血清,构建适用于哺乳动物细胞的真核表达载体.方法将重组蛋白表达载体pET30a（+）/YWHAB转化大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）感受态细胞,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达,镍-四齿螯合剂（Ni-NTA）亲和层析柱纯化重组蛋白;以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用ELISA和Westernblot方法分别检测抗血清的效价和特异性;应用PCR扩增添加BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点把YWHAB的ORF亚克隆至真核表达载体pEGFP-N1,添加BamHⅠ和HindⅢ酶切位点把YWHAB的开放阅读框（ORF）亚克隆至真核表达载体pCDNA3.1（+）,对重组载体进行酶切和PCR鉴定.结果YwHAB重组蛋白以可溶性形式表达,分子量为32000,与预期分子量一致;纯化后的重组蛋白纯度达90%以上,ELISA结果显示其抗血清的效价为1:

50000,Westernblot结果表明抗血清的特异性较好;酶切和PCR鉴定结果表明真核表达载体pEGFP-N1/YWHAB和pCDNA3.1（+）YWHAB构建成功.结论通过亲和层析纯化获得人14-3-3β重组蛋白,进而免疫BALB/c小鼠制备多抗血清,为进一步研究人14-3-3β的功能成功构建了其真核表达载体.

人生存素基因的克隆、表达与抗血清制备

摘要：

目的克隆表达重组人生存素,制备其抗血清并检测其免疫识别活性.方法用RT-PCR方法从培养的人白血病细胞株HL-60中克隆人生存素cDNA,克隆到原核表达载体pET32a（+）,重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）进行表达,目的蛋白经Ni-NTA树脂亲和纯化后免疫小鼠制备抗血清,ELISA检测抗血清的效价,Westernblot和免疫细胞化学法鉴定抗血清的特异性.结果所克隆生存素cDNA序列与Genbank中序列完全一致,将其读码框插入原核表达载体pET32a（+）诱导表达后,SDS-PAGE电泳分析证实重组蛋白为分子量约37KD的融合蛋白,表达量占总茵体的30%,纯化后融合蛋白的纯度为95%,所制备的鼠抗血清的效价达1:

1600,Westemblotting证实其有较好的特异性,可以检测肿瘤细胞生存素的表达.结论我们已克隆并表达了人生存素基因,所制备的抗人生存素血清可用于相关肿瘤检测

小鼠Foxp3抗血清的制备及应用doi：

摘要：

目的:

制备高效价的特异性小鼠Foxp3抗血清,并初步应用于正常小鼠组织的Foxp3表达的鉴定.方法:

构建重组质粒pGEX-6p-2/Foxp3,并转化至E.coliBL21（DE3）中进行大量诱导表达,用纯化的重组融合蛋白免疫新西兰兔,制备抗血清.以制备的抗血清为一抗,Westernblot检测小鼠组织的Foxp3蛋白的表达.结果:

SDS-PAGE及Westernblot鉴定,诱导表达及纯化的重组融合蛋白能被抗GST单克隆抗体（mAb）识别,在Mr45000附近有特异条带,与预期融合蛋白大小一致,获得的抗血清效价在1:

12800以上,该抗血清能特异性识别NIH3T3细胞中表达的Foxp3蛋白.Westernblot鉴定结果显示在脾脏、胸腺、淋巴结中Foxp3蛋白有较高表达,胃也有少量的表达,而骨骼肌、脂肪组织未见表达.结论:

制备了高效价的特异性小鼠Foxp3抗血清,并可用于正常小鼠组织的Foxp3蛋白的表达鉴定,为进一步研究Foxp3奠定了实验基础.

不同免疫途径对制备抗血清影响的探讨

摘要：

[目的]比较不同免疫途径制备自蛋白抗血清的效价,研究既筒便又效价高的制备免疫血清的最佳方法.[方法]以小牛血清白蛋白（Bovineserumalbumin,BSA）加完全佐剂为抗原,通过皮内、多途径、肌肉注射3种途径免疫家兔,测定不同免疫途径的抗血清效价.[结果]皮内免疫的抗血清效价最高1:

64,最低1:

16;多途径免疫的抗血清效价最高1:

32,最低1:

16;肌内免疫的抗血清效价最高1:

16,蕞低1:

8.[结论]皮内免疫途径剞备白蛋白抗血清的方法简便,效价高,对实验动物的损伤小,是一种理想的制备教学用免疫血清的方法.

猪干扰素γ的原核表达及抗血清的制备

摘要：

目的原核表达猪干扰素γ（poIFNγ）,并制备其抗血清.方法PCR扩增poIFNγ成熟多肽基因片段,克隆至原核表达载体pET-28a（+）中,构建重组表达质粒pET-28a-poIFNγ,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达.表达的蛋白纯化后免疫小鼠,制备抗血清,ELISA检测抗血清的效价.结果重组原核表达质粒pET-28a-poIFNγ经双酶切和测序证明构建正确;重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%,主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度可达90%;制备的抗血清效价可达10~（-5）.结论已成功地在大肠杆菌中表达了poIFNγ,并制备了较高效价的抗血清.

鸡A-FABP抗血清制备及其组织表达特性分析

本文旨在制备鸡脂肪型脂肪酸结合蛋白（A-FABP）的多克隆抗血清，并分析A-FABP的组织表达特性。

RT-PCR扩增A-FABP基因，构建鸡A-FABP基因的GST融合蛋白表达质粒pGEX-4T/A-FABP。

将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导产生GST/A-FABP融合蛋白，用亲和层析纯化目的蛋白，将纯化的GST/A-FABP融合蛋白免疫家兔制备抗血清，并利用此抗血清分析鸡A-FABP基因的组织表达特性。

本研究诱导得到了一个40kDa（14kDa-FABP+26kDaGST）的融合蛋白，获得了效价较高、特异性强的鸡A-FABP的抗血清。

鸡A-FABP的组织表达特性研究结果表明，该基因在脂肪组织中有较高表达，但在心脏、肝脏、肌肉、肌胃、脾、小肠、肺和肾中没有检测到信号。

小鼠Foxp3抗血清的制备及应用

摘要：

目的:

制备高效价的特异性小鼠Foxp3抗血清,并初步应用于正常小鼠组织的Foxp3表达的鉴定.方法:

制备了高效价的特异性小鼠Foxp3抗血清,并可用于正常小鼠组织的Foxp3蛋白的表达鉴定,为进一步研究Foxp3奠定了实验基础.

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