克林霉素磷酸酯注射液HPLC分析方法确认方案.docx
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克林霉素磷酸酯注射液HPLC分析方法确认方案
克林霉素磷酸酯注射HPLC
分析方法确认报告
######制药有限公司
确认方案审批表
确认方案名称:
克林霉素磷酸酯注射液HPLC分析方法确认方案
确认方案编号：
审批
程序
部门
签名
日期
起草
检验室
审核
QC主任
质量保证部
批准人
质量负责人
目录
1概述
2确认目的
3确认范围
4确认小组成员与职责
5确认方案的审核与批准
6进度计划
7确认内容
8变更与偏差
9确认结果与评价报告
1概述
克林霉素磷酸酯注射液收载于国家药品标准，含量及有关物质的检验均使用高效液相色谱仪进行检验，两个项目检验参数等条件完全相同，且我公司未对《中国药典》2010年版二部中的方法进行过任何改变，因此按照2010新版GMP要求，需要进行分析方法确认。
本确认方案使用LC600—梯度型高效液相色谱仪对克林霉素磷酸酯注射液采用《中国药典》2010年版二部“含量”、“有关物质”的检验方法进行确认，证明此方法在本公司实验室的适用性。
含量、有关物质需确认项目如下：
确认项目
准确度
精密度
专属性
定量限
含量
有关物质
“是”代表该项内容需确认，“否”代表该项内容不需要确认
2确认目的
通过对克林霉素磷酸酯注射液含量及有关物质的检验方法的确认，证明此方法在本公司实验室的适用性。
3确认范围
本确认方案适用于克林霉素磷酸酯注射液含量、有关物质的检验方法进行确认。
4确认小组成员与职责
部门及职务
确认工作中职责
检验员
确认执行人：
负责起草确认方案，执行确认方案，负责验
证过程中相关的检验操作，收集整理数据，起草确认报告。
质量保证部
负责确认方案及确认报告的审核；审核确认过程中发生偏差的解决方案，以及采取纠正措施。
QC主任
确认组长：
负责确认方案的审核并组织实施，审核确认报告。
质量负责人
确认总负责人：
负责确认方案、报告的批准
5确认方案的起草与审批
5.1确认方案的起草与审批：
确认方案由检验室起草，确认小组会审，质量负责人批准实施。
5.2确认方案的培训：
确认方案经批准后及实施前，由QC主任对本次确认方案实施的检验人员和相关人员进行培训。
5.3确认方案的修改：
确认方案如需修改，由质量负责人批准实施，在确认报告中体现。
6进度计划
整个确认活动实施时间：
确认时间：
从_____年___月__日至_____年__月__日；
7确认内容
7.1确认前仪器及材料检查
7.1.1确认前，对下列试验用仪器和材料进行检查
7.1.1.1LC600—梯度高效液相色谱仪
7.1.1.2.BS21S型分析天平
7.1.1.3色谱柱：
7.1.1.4对照品和试剂
7.1.1.5其他一些辅助的玻璃仪器（如容量瓶、移液管等）
7.1.2可接受标准：
仪器和用具经校验且在效期内；对照品、试液、试剂与试药符合验证要求且在效期内；色谱柱、色谱仪使用状态正常。
7.1.3结果记录：
将结果记录在附件1《确认前仪器及材料检查表》中。
7.2确认及文件检查
7.2.1确认前，对与此次确认相关的文件进行检查
7.2.1.1克林霉素磷酸酯注射液检验操作规程（QC-SOP-04-002）
7.2.1.2LC600—梯度型高效液相色谱系统标准操作及维护保养规（QC-SOP-A-12）
7.2.1.3LC600—梯度型高效液相色谱系统维护保养及清洁操作规（QC-SOP-A-12）
7.2.1.BS21S型分析天平标准操作规程（QC-SOP-A-02）
7.2.1.BS21S型分析天平维护保养及清洁标准操作规程（QC-SOP-A-02）
7.2.1.6高效液相色谱法标准操作规程（）
7.2.1.7克林霉素磷酸酯注射液HPLC分析方法的验证方案（）
7.2.1.9检验方法验证（确认）管理规程（QM--QC-027）
7.2.2可接受标准：
所有文件都应为现行版本，且经过批准。
7.2.3结果记录：
将结果记录在附件2《确认前文件检查表》中。
7.3人员培训确认
7.3.1检查并确认所有参与执行确认的人员是否已得到培训，并在培训记录上签字。
7.3.2可接受标准：
验证小组成员均已经过培训，并在培训记录上签字。
7.3.3确认结果：
将确认结果填入附件3《人员培训、参与情况确认记录》中。
7.4确认项目
7.4.1“含量”项确认
7.4.1.1重复性/准确度
7.4.1.1.1空白的制备：
以磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾10.54g，加水溶解稀释成775ml，用80%磷酸调节pH值2.5）-乙腈（775：
:
225）流动相作为空白液。
7.4.1.1.2对照液制备：
取克林霉素磷酸酯对照品约4.8mg，精密称定，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照液；对照液平行制备2份，标识为S-1、S-2。
7.4.1.1.3样品制备：
取克林霉素磷酸酯约4.8mg，精密称定，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为样品液。
同方法：
平行制备浓度梯度为标示量80%、100%、120%的样品各3份，标识为A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9。
7.4.1.1.4方法描述：
色谱条件与系统适用性试验：
用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾10.54g,加水775ml使溶解,用85%磷酸溶液调节pH值至2.5）—乙腈（775:
225）为流动相;检测波长为210nm。
理论塔板数按克林霉素磷酸酯峰计算，应不低于1500。
克林霉素磷酸酯与相邻峰的分离度应符合规定。
测定法：
精密量取本品1.0ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取2.0ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为供试品溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；取克林霉素磷酸酯对照品约120mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
同法测定，按外标法计算。
7.4.1.1.5测定：
1）取S-1精密量取10μl，注入液相色谱仪记录色谱图，该溶液连续进样2针。
2）取S-2精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，该溶液连续进样2针。
3）分别精密量取A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9溶液各10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。
4）计算S-1和S-2的F值，相对标准偏差应≤2.0%，按外标法以峰面积计算。
计算A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9溶液的含量。
结果计算
含量（cx）=CR×Ax/AR
cx--------为供试品的浓度；
CR---------为对照品的浓度；
Ax--------为供试品的峰面积；
AR---------为对照品的峰面积。
7.4.1.1.6可接受标准：
A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9，各浓度样品含量的RSD%值应≤2.0%。
7.4.1.1.7确认记录和数据
确认数据和结果记录于附件4《含量精密度/准确度确认数据和结果》中。
7.4.1.2专属性
7.4.1.2.1测试方法：
7.4.1.2.1.1取空白液进样1针，记录色谱图。
7.4.1.2.1.2精密量取本品1.0ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取2.0ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为供试品溶液，取10μl注入液相色谱仪，进样1针，记录色谱图，获得主成分主峰的保留时间。
7.4.1.2.1.3取克林霉素磷酸酯对照品约120mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
精密量取20μl，注入液相色谱仪，进样1针，记录色谱图，获得主成分主峰的保留时间。
7.4.1.2.1.4可接受标准：
溶剂空白相应的峰对样品测定有无明显的干扰；供试品图谱中主成分主峰保留时间与对照品图谱中主成分主峰保留时间一致。
7.4.1.2.1.5确认记录和数据
确认数据和结果记录于附件5《专属性确认数据和结果》中。
7.4.2“有关物质”项确认
7.4.2.1专属性
7.4.2.1.1精密量取本品2.0ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，制成每1ml中含3mg的溶液，作为供试品溶液。
7.4.2.1.2对照溶液；精密量取上述供试品溶液1.0ml，置100ml容量瓶中，加流动相
稀释至刻度，制成每1ml中含0.03mg的溶液，作为对照溶液。
7.4.2.1.3照含量测定相下的方法试验，取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为记录仪满量程的10%～25%，再取供试品溶液和对照溶液各10ul注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍，
7.4.2.1.4可接受标准：
供试品溶液如显杂质峰，与对照溶液主峰面积比较，单杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的4.0倍（4.0%）；各杂质峰面积的总和不得大于对照溶液主峰面积的6.0倍（6.0%）。
忽略不计小于对照溶液主峰面积10.0%的色谱峰。
7.4.2.1.5确认记录和数据
确认数据和结果记录于附件5《专属性确认数据和结果》中。
7.4.2.2精密度
7.4.2.2.1测试程序
7.4.2.2.1.1
取克林霉素磷酸酯约120mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液D-2。
7.4.2.2.1.2精密量取本品1.0ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，制成每1ml中含0.48mg的溶液，同法配制6份平行样品作为供试品溶液分别为B-1、B-2、B-3、B-4、B-5、B-6。
7.4.2.2.1.3D-1进样2针，D-2进样2针，然后B-1、B-2、B-3、B-4、B-5、B-6分别进1针，记录色谱图。
7.4.2.2.1.4各相邻峰之间的分离度应≥1.5
7.4.2.2.1.5以外标法计算B-1、B-2、B-3、B-4、B-5、B-6溶液含量。
计算：
7.4.2.2.1.2可接受标准：
6个样品B-1、B-2、B-3、B-4、B-5、B-6溶液主峰的面积。
RSD%值应≤2.0%。
7.4.2.2.1.3确认记录和数据
确认数据和结果记录于附件6《有关物质及精密度确认数据和结果》中。
7.4.2.3定量限
7.4.2.3.1在上述色谱条件下取克林霉素磷酸酯对照品约120mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成每1ml中含0.03mg的溶液，作为对照溶液。
再逐步稀释置适当的浓度，进样，直至当待测组分的信噪比约为10倍时（即主成分主峰高为噪音峰高约10倍时），对应的浓度为该组分的最小定量浓度（Cm2），重复进样3次，记录色谱图。
7.4.2.3.2计算公式
式中：
hi：
测试溶液中主成分的峰高；
hb：
基线噪声的峰高；
h0：
空白溶液的色谱图中基线的峰高。
7.4.2.3.3可接受标准：
上述杂质的定量限应小于产品中各类杂质限度标准的10%。
7.4.2.3.4确认记录和数据
确认数据和结果记录于附件7《定量限确认数据和结果》中。
8变更与偏差
若确认方案需要变更，须按方案制定时的审批程序进行批准；若系统发生重大变更，应重新制定确认方案。
确认过程中应严格按照本确认方案执行，出现个别项目不符合标准结果时，应按偏差管理规程进行处理，有异常事项未解决时，不得进行下一步的工作。
所有偏差、异常情况处理过程均应记录备案，并登记到附件8中。
9确认的结果与评价报告
由质量保证部和检验室主任对分析方法确认的结果进行审核，检查所有测试项目已经完成；变更和偏差都已经得到解决和批准；每个项目均应符合它们的确认可接受标准；确认记录完整。
由检验室填写确认报告，由确认组长在报告中签署评审结论，提交确认总负责人进行批准。
附件9中。
附件目录
附件
附件名称
附件1
确认前仪器及材料检查表
附件2
确认前文件检查表
附件3
人员培训、参与情况确认记录
附件4
含量精密度/准确度确认数据和结果
附件5
专属性验证数据和结果
附件6
有关物质及精密度确认数据和结果
附件7
定量限确认数据和结果
附件8
变更偏差情况确认记录
附件9
确认结果与评价报告
附件1
确认前仪器及材料检查表
序号
名称
仪器编号
证书编号
有效期至
高效液相色谱仪
分析天平
色谱柱
克林霉素磷酸酯对照品
克林霉素磷酸酯注射液
磷酸二氢钾
甲醇
确认标准
确认结果
确认所用的仪器经过校验且在有效期内，试药、试液均在有效期内。
确认结论：
检查人/日期
复核人/日期
附件2
确认前文件检查表
文件名称
文件编号
是否现行文本
检验方法验证（确认）管理规程
QM-QC--027
BS21S型分析天平标准操作规程
QC-SOP-A-02
BS21S型分析天平维护保养及清洁标准操作规程
QC-SOP-A-02
LC600—梯度型高效液相色谱系统标准操作规程
QC-SOP-A-12
LC600—梯度型高效液相色谱系统维护保养及清洁标准操作规程
QC-SOP-A-12
高效液相色谱法标准操作规程
QC-SOP--002
克林霉素磷酸酯注射液检验操作规程
QC-SOP—04--002
克林霉素磷酸酯注射液生产工艺规程
T2-01-003--1
克林霉素磷酸酯注射液HPLC分析方法的确认方案
检查人
检查日期
检查结果
附件3
人员培训、参与情况确认记录
授课地点
室
日期
授课内容
克林霉素磷酸酯注射液HPLC分析方法确认方案
部门
职务
培训人
检验室
QC主任
部门
职务
受培训并参与方案实施人员
检验室
检验员
检验室
检验员
质量保证部
质保部长
质量保证部
质量授权人
确认标准
确认结果
确认所有参与执行本确认的人员已经得到培训，并在培训记录中签字。
确认结论：
检查人/日期
复核人/日期
附件4
含量精密度/准确度确认数据和结果
1S-1
No
1
2
平均值
RSD%
主成分峰面积
2S-2
No
1
2
平均值
RSD%
主成分峰面积
380%浓度
No
A-1
A-2
A-3
平均值
RSD%
含量
RSD%
主成分峰面积
4100%浓度
No
A-4
A-5
A-6
平均值
RSD%
含量
RSD%
主成分XX峰面积
5120%浓度
No
A-7
A-8
A-9
平均值
RSD%
含量
RSD%
主成分峰面积
6确认结论
可接受标准
验证结果
是否符合
各浓度含量的RSD%值应≤2.0%
确认结论：
检查人/日期
复核人/日期
附件5
专属性验证数据和结果
确认项目
对照品
保留时间
样品
保留时间
空白
检验结果
检验人
含量专属性
主成分峰
有关物质专属性
单最大杂质峰
单最大杂质峰RSD≤10.0%
检验人/日期
复核人/日期
备注
附检验原始记录
确认结论：
检查人/日期
附件6
有含量及精密度确认数据和结果
1D-
No
1
2
RSD
平均值
对照主峰面积
2样品
No
样品
的峰面积
B-1
B-2
B-3
B-4
B-5
B-6
RSD
平均值
含量
3确认结论
可接受标准
验证结果
是否符合
含量的RSD%值应≤2.0%
确认结论：
检查人/日期
复核人/日期
附件7
定量限验证数据和结果
1.定量限测定结果
定量限测定
信噪比
最小定量浓度
（µg/mL）
对照品溶液
第一针
第二针
第三针
检验人/日期
复核人/日期
2确认结论
确认结论：
检查人/日期
复核人/日期
附件8
变更偏差情况记录
序号
发生日期
偏差/变更内容描述
处理措施
签名/日期
确认标准
确认结果
在本方案实施过程中所发生的偏差或变更，已处理完毕并已作好记录。
确认结论：
检查人/日期
复核人/日期
附件9
确认结果与评价报告
分析方法名称
验证参加人员
验证时间
年月日至年月日
检测项目
验证情况
是否通过
1
精密度
3
专属性
4
定量限
质量保证部确认结论:
签名/日期：
验证小组长评审结论：
签名/日期：
验证总负责人批准意见：
签名/日期：
升级会员 