微生物标准操作流程样本.docx

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微生物标准操作流程样本

微生物标准化操作规程

生物安全柜操作规程及维护

1.目的:

为了满足生物安全操作的要求,而且达到在操作时保护操作人员的目的,使细菌操作达到无菌操作的要求,便于操作的标准化。

2.原理:

经过使用空气超高过滤器（ULPA）的过滤,使仪器内部的空气洁净度达到100级,使细菌的一般操作限制在一个相对密闭的环境中,不但保护操作人员,还可满足操作的标准化。

3.工作条件:

环境温度:

18－30℃相对湿度:

<80%

安装的环境必须达到一定的洁净度;远离人员通道及有潜在干扰气流的位置;柜后及两侧各留30cm的空隙,顶部30-35cm空隙。

环境必须有良好的通风设备。

4、操作步骤:

生物安全柜的设置已经设置完全,如果需要重新设置请参看HFsafe生物安全柜使用说明。

具体操作步骤为:

4.1将电源插头插入准备好的固定插座,连通电源。

4.2有系统管理员（即本室负责人）开启玻璃门门锁,并将总开关置于开位置”!

”,此时系统开始上电。

4.3检查显示及按钮的各项功能,具体见后附注（注意:

UV灯的测试除外,开启UV灯时必须将前玻璃门关闭）。

4.4当系统稳定后,对设备进行安全性检查。

（检查项目包括:

工作室平均垂直风速;工作室内可操作区域洁净度达到100级;设备的密封有没有被破坏。

所有的安全检查项目中的洁净度建议由当地卫生防疫部门来进行尘埃粒子数、沉降菌和菌落数的检测,看是否符合其工作室的洁净度要求）。

4.5如果安全性测试经过,系统已经能够使用,请在《使用记录》上写下相应的信息。

在使用时需要注意的是,操作必须在工作台板无孔区域进行,物品也必须放置于无孔区域。

4.6操作者应先把手臂放进安全柜内大约1分钟,以使柜子适应而且让气流扫过手臂手臂移入移出柜内应保持前门气流的连续性,应缓缓移入移出,而且方向和前门垂直;为使跨越前门的动作量降低,在实验开始前应把所需的物品放入柜子;柜子在开始工作前以及完成后至少要运行5分钟是,使柜子净化,以便于污染空气从柜内排出。

实验操作方向应从清洁区到污染区,一般要求为左→右。

4.7当工作完成后需要关机前,将试验使用的所有材料和其它物品从设备中取出。

4.8关闭前玻璃门前,需要维持气流循环一段时间（时间长短视所操作材料的危险性而定）。

4.9关闭风机,停止气流循环。

4.10每日使用后维护（见后面维护中的第一二步）。

4.11维护完成后,关闭电源开关。

4.12锁住前玻璃门,并如实填写《使用记录》。

5、仪器的维护:

5.1基本保养:

5.1.1清洁:

在一般的情况下,清洁只需要用少量家用或商用的碗碟清洗剂,将它溶于水后直接擦洗,就可将设备表面的污染擦掉。

请不要擦拭任何玻璃,以免产生摩擦。

5.2在使用过程中每日或每周的清洁:

5.2.1消毒（一般使用1000mg/L的次氯酸钠溶液）和清洁工作室

5.2.2对操作面板进行消毒和清洗。

5.2.3用柔性的清洁剂或玻璃专用清洁剂清洗箱体外表面和玻璃。

5.2.4对照说明书对设备的各种功能进行检查。

5.2.5将本次工作记录下来。

5.3月清洗:

5.3.1用清洁剂将所有外表面的尘埃清除。

5.3.2对设备内部进行消毒处理。

5.3.3对设备进行功能检验,并在一般使用时检查设备的安全。

5.3.4将本次清洗记录下来。

5.3.5每月必须对紫外灯进行照射强度检测。

5.4每年维护:

5.4.1对设备进行安全性全面的检查,对设备进行维护。

包括柜体防泄露、高效过滤器的完整性、人员保护能力、产品保护能力、下降气流流速、流入气流流速、负压、气流模式、警报和联锁等的检测。

一般安全检测由仪器公司进行。

5.4.2检查前玻璃门驱动装置的松劲程度。

5.4.3检查紫外灯管。

5.4.4将本次维护记录下来。

5.5每两年更换日光灯管。

5.6故障的维护处理:

当故障发生时必须停止一切操作,尽量维持设备内部空气的循环过滤,将正在进行的试验材料和工具全部取出并妥善管理,然后通知有关部门前来维修。

每次仪器出现故障时必须填写故障登记表,注明故障情况及处理情况。

常见的故障,原因及其处理方法见下表:

现象

原因

处理方法

备注

照明光源或紫外灯无法点亮

线路故障

检查线路

灯管坏

更换灯管

镇流器失效

更换镇流器

蜂鸣器间断报警

过滤器失效

更换过滤器

安全检查

蜂鸣器连续报警

可能玻璃门过高

向下调整玻璃门

6、注意事项:

6.1只有负责管理本设备的人员才有权关闭风机。

6.2只有经过培训和指导的人员才能操作本设备。

6.3顶部通风口不能被任何东西覆盖以保证排气通畅。

6.4当系统失效时会发出声讯号,此时不能继续操作,否则会导致材料的损失,污染和人身安全方面的危险。

6.5如果发现过滤器失效,要更换过滤器时,必须由专业人员进行更换。

6.6柜内溅出物的处理:

在柜内如果出现危险生物材料溅出,应该不能关闭风机继续运行,覆盖滤纸或吸水纸于溅出物表面,然后向滤纸上滴加消毒液（1000mg/L的次氯酸钠溶液）浸泡5分钟,用钳子钳取滤纸丢入感染性废物收集袋中,然后用浸泡了消毒液的干净抹布擦拭柜内表面。

6.7生物安全柜内避免使用明火,因为使用明火会破坏柜内的气流方向。

也禁止使用易挥发易燃易爆物品,以免造成危险。

接种环能够使用微波炉或”电炉”,最好使用一次性接种环。

实验室高压蒸气灭菌器操作程序

1．目的:

1.1培养基等的液体灭菌,溶解。

1.2器具等的灭菌。

1.3废弃物的处理灭菌。

2．原理:

高压蒸气灭菌。

灭菌温度105℃-135℃,溶解温度60℃-100℃,保温温度45℃-60℃;压力0-0.235兆帕

3．工作条件:

环境温度:

5℃-35℃

背面距离墙10厘米以上,右侧距离墙5厘米以上。

需放置在无阳光直接照射及湿度不高,灰尘少的地方。

4.操作步骤:

放置排气储存桶

注意:

不得在灭菌器附近放置或放入可燃性物质,爆炸性物质,氧化性物质,易燃性物质,可燃性气体。

在排气容器孔中务必插入排气软管添密件,关紧盖罩,

接通电源开关

注意:

安装专用电源连接插口,安装地线,可靠接地。

发生异常情况时立即停止运转,切断电源。

检修时要切断电源。

打开盖子

注入加热用水

注意:

需采用蒸馏水或自来水。

放入灭菌物品

注意:

不得将灭菌物品装入蒸气不能进入的容器和袋子,否则无法灭菌;装盛灭菌物品的容器不得密封。

不要让灭菌物品堵塞和挤压灭菌器内的孔和温度传感器。

仅对试管,烧瓶等容器本身灭菌时,开口要向下或横放。

物品灭菌时,应同时放入监控指标。

用对热敏感的染料标记的变色带子。

灭菌时,将变色带夹放在试验包裹中,以监视灭菌效果,

关闭盖子

选择过程（变更设定内容）（设定预定运行作业）

注意:

运行中要开启排水阀。

按下操作按钮

R1或b1C1D1

灭菌.保温灭菌.溶解器具灭菌

运行注意:

运行中如有蒸气泄漏时,不要靠近安全阀排气口。

运行完毕,打开盖子,取出灭菌物品

注意:

不要被烫伤,脸不要靠近灭菌器。

切断电源开关

排放加热用水

物体表面细菌监测

1.目的规范物体表面采样及监测标准操作规程。

2.适用范围

2.1医院感染监控重点科室,每月常规监测。

2.2发生医院感染暴发流行。

3、职责医院感染管理专职人员或兼职人员应遵守本程序。

4.程序方法

监测对象:

选择有代表性的可能污染表面

采样时间:

选择消毒处理后,4小时内进行

采样面积:

100cm2

4.125cm2细菌定量采样皿培养法:

①使用时将采样器去盖,在待测物品上直接接触10秒钟后加盖（采样皿为一样本面积不得少于10cm2）。

②将采样皿置35～37℃温箱培育18－24小时,直接细菌计数（细菌个数／cm2）和分离鉴定细菌。

4.2棉拭子涂擦法:

对物体表面采样时,将内径为5×5cm2的灭菌规格板放在被检物表面,用浸有灭菌生理盐水的棉拭子,在规格板空心处涂抹5次（往返为一次）;移动规格板,按同样方法涂抹采样,连续采样4次（采样4次为一样本）剪掉或烧去手接触部分。

将棉拭子放入装有10亳升的灭菌生理盐水的采样管中,送实验室进行培养鉴定细菌和细菌计数。

门把手等小型物体则用棉拭子直接涂擦物体表面,以每件为单位计算,较大门把手等则按面积（cm2）计算。

5、结果判断

5.1一、二类区域细菌总数≤5CFU/cm2,并未检出致病菌为消毒合格。

5.2三类区域细菌总数≤10CFU/cm2,并未检出致病菌为消毒合格。

5.3四类区域细菌总数≤15CFU/cm2,并未检出致病菌为消毒合格。

5.4母婴同室、婴儿室、新生儿室及科病房的物体表面不得检出沙门菌为合格。

医护人员手指细菌监测

1.目的

规范医务人员手采样标准操作程序。

2.适用范围

手卫生监测。

3.职责

医院院感管理专职人员或兼职人员应遵守本程序。

4.程序

4.1采样时间:

在接触病人,人事医疗活动前进行

4.2采样面积及方法:

被检人五指并拢,将带有无菌生理盐水的棉拭子放在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各2次（往返算一次）并随之转动采样拭子剪去手接触部分,将棉拭子放入10ml采样液试管内送检（每只手面积均为30cm2）

4.3结果计算:

手污染细菌菌落数（Cfu/cm2）＝平器上菌落数×稀释倍数

30

5结果判断

5.1一、二类区域工作人员细菌总数≤5CFU/cm2,并未检出金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及铜绿假单胞菌为消毒合格。

5.2三类区域工作人员细菌总数≤10CFU/cm2,并未检出金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及铜绿假单胞菌为消毒合格。

5.3四类区域工作人员细菌总数≤15CFU/cm2,并未检出金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及铜绿假单胞菌为消毒合格。

5.4母婴同室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的工作人员手上,不得检出沙门菌、大肠埃希菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌为合格。

5.5注意事项被检人洗手消毒后切勿擦干。

空气中细菌含量的监测

1.目的

正确进行空气细菌含量的监测。

2.适用范围

2.1医院感染监控重点科室,每月常规监测。

2.2发生医院感染暴发流行时。

3.职责医院感染管理专职人员或兼职人员应遵守本程序。

4.程序

4.1采样时间:

选择消毒处理后与进行医疗活动期间采样。

4.2采样高度:

与地面垂直高度为80－150cm。

4.3布点方法:

室内面积≤30㎡设三点,≥30㎡设五点

4.4采样方法:

平皿暴露法:

将9cm直径的玻璃普通营养琼脂或血琼脂平血,放在室内3个或5个采样点上,将平皿盖打开,叩放于平皿旁,暴露5分钟,盖好。

置37℃温箱培养24－48小时观察结果,并计数3个或5个平器中的平均菌落数。

细菌数cfu／m3=N100×5×1000＝50000N

AT10AT

A＝平皿面积（cm2）N＝平均菌落数T＝平皿暴露于空气中的时间（分）

5.结果判定

5.1一类区域细菌总数≤10CFU/m3（或0.2CFU/平板）,并未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格。

5.2二类区域细菌总数