11、肽链N-末端氨基酸残基的鉴定常用DNFB(2,4-二硝基氟苯)及PITC(苯异硫氰酸酯)等试剂与N-端氨基酸反应。
Edman降解法是多肽链N端氨基酸残基被苯异硫氢酸酯修饰,然后从多肽链上切下修饰的残基,经层析鉴定可知N端氨基酸的种类,而余下的多肽链仍为一条完整的多肽链,被回收后可继续进行下一轮Edman反应,测定N末端第二个氨基酸。
反应重复多次就可连续测出多肽链的氨基酸顺序。
FDNB法(Sanger反应)是多肽链N末端氨基酸与FDNB(2,4-二硝基氟苯)反应生成二硝基苯衍生物(DNP-蛋白),然后将其进行酸水解,打断所有肽键,N末端氨基酸与二硝基苯基结合牢固,不易被酸水解。
水解产物为黄色的N端DNP-氨基酸和各种游离氨基酸。
将DNP-氨基酸抽提出来并进行鉴定可知N端氨基酸的种类,但不能测出其后氨基酸的序列。
12、与10重复
13、蛋白质变性以后,空间/高级结构遭到破坏,而一级结构仍然保持完整。
14、在进行蛋白质的N末端氨基酸序列分析中,主要利用DNFB反应反应,目前研究蛋白质晶体结构的方法主要是X-射线衍射法。
15、今有甲、乙、丙三种蛋白质,它们的等电点分别为8.0、4.5和10.0,当在pH8.0
缓冲液中,它们在电场中电泳的情况为:
甲____不泳动___,乙___向正极泳动____,丙___向负极泳动_____。
三、名词解释
两性离子(dipolarion)等电点(isoelectricpoint,pI)
构型(configuration):
指在立体异构体中不对称碳原子上相连的各原子或取代基团的空间排布。
构型的转变伴随着共价键的断裂和重新形成。
构象(conformation):
指有机分子中,不改变共价键结构,仅单键周围的原子或集团旋转所产生的空间排布。
一种构象改变为另一种构象时,不涉及共价键的断裂和重新形成。
构象改变不会改变分子的光学活性。
蛋白质的一级结构(proteinprimarystructure) 蛋白质的二级结构(proteinsecondarystructure)结构域(domain)超二级结构(super-secondarystructure)蛋白质的三级结构(proteintertiarystructure)蛋白质的四级结构(proteinquaternarystructure)盐析(saltingout)盐溶(saltingin)蛋白质的变性(denaturation)
四、简答题
1、简述蛋白质一、二、三、四级结构的定义及主要维持键,并谈谈你对蛋白质四个结构层次的认识。
2、蛋白质有哪些重要功能?
3、什么是蛋白质的变性,引起蛋白质变性的因素有哪些?
4、简述蛋白质二级结构a-螺旋的结构特点。
5、简述蛋白质胶体稳定的原因。
6、简述致使蛋白质沉淀的因素
7、试解释下列现象:
用热水洗涤羊毛衫时,羊毛衫会变长,洗后放在电热干燥器内干燥时,羊毛衫又会收缩,而丝绸制品经过同样的处理却不会收缩。
8、常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种?
各自的作用原理是什么?
第二章核酸化学练习题
一、选择题
1、ATP分子中各组分的连接方式是:
(B)
A.R-A-P-P-PB.A-R-P-P-PC.P-A-R-P-PD.P-R-A-P-P
(注R代表核糖环)
2、关于tRNA的结构与功能正确的叙述是:
(C)
AtRNA不具有二级结构 BtRNA具有转肽酶活性CtRNA将氨基酸携至核糖体 D反密码子环不是tRNA特有的
3、决定tRNA携带氨基酸特异性的关键部位是:
(E)
A.–XCCA3`末端B.TψC环;
C.DHU环D.额外环E.反密码子环
4、根据Watson-Crick模型,求得每一微米DNA双螺旋含核苷酸对的平均数为:
D
A.25400B.2540C.29411D.2941E.3505
5、含有稀有碱基比例较多的核酸是:
C
A.胞核DNAB.线粒体DNAC.tRNAD.mRNA
6、DNA变性后理化性质有下述改变:
B
A.对260nm紫外吸收减少B.溶液粘度下降
C.磷酸二酯键断裂D.核苷酸断裂
7、在核酸分子中核苷酸之间连接的方式是(C )
A、2′-3′磷酸二酯键B、2′-5′磷酸二酯键
C、3′-5′磷酸二酯键D、肽键 E、糖苷键
8、有关DNA结构的描述,下列哪项是错误的:
(D)
A右手双螺旋B由两条方向相反的链组成
C两链间形成严格的碱基配对
D嘌呤与嘧啶的分子数上无明显规律
E配对碱基以氢键相连
9、双链DNA的Tm较高是由于下列哪组核苷酸含量较高所致:
D
A.A+GB.C+TC.A+TD.G+CE.A+C
10、DNA变性以后有关的叙述正确的(A)
A紫外吸收增加,粘度降低。
B紫外吸收降低,粘度增加。
C分子量降低,生成部分单核苷酸。
D磷酸二酯键断裂。
11、甲、乙两种不同来源的DNA,甲的碱基A的含量(摩尔分数,下同)=20%,乙的碱基C含量=30%,它们的热变性温度(即解链温度、“熔点”、Tm)之间的关系是(D)。
A甲>乙B甲<乙C甲=乙D数据不全,无法判断
12、三种RNA在细胞中的含量,由小到大的排序,正确的是(A)
AmRNA<tRNA<rRNABtRNA<mRNA<rRNA
CmRNA<rRNA<tRNADrRNA<tRNA<mRNA
信使RNA(messengerRNA,mRNA):
是蛋白质合成的直接模板,占细胞总RNA的5%左右。
核糖体RNA(ribosomalRNA,rRNA):
是核糖体的主要组分,约占细胞总RNA的80%左右,在翻译过程中还具有重要的催化作用。
转移RNA(transferRNA,tRNA):
其功能是将特异的氨基酸运送到核糖体参与多肽合成,约占细胞总RNA的15%。
13、下列关于RNA的论述,哪一项是错误的(D)
A主要有mRNA、tRNA、rRNA等种类
B原核生物没有hnRNA和snRNA
CtRNA是最小的一种RNA(一般有76个核苷酸,由于核苷酸数目可变性,74-96个核苷酸之间)
D胞质中只有一种RNA,即tRNA
E组成核糖体的RNA是rRNA
14、tRNA分子的3′末端的碱基序例是(A)
ACCA-3′BAAA-3′CCCC-3′DAAC-3′
15.真核生物DNA缠绕在组蛋白上构成核小体,核小体含有的核心组蛋白是D
A.H1、H2、H3、H4各两分子B.H1A、H1B、H2B、H2A各两分子
C.H2A、H2B、H3A、H3B各两分子D.H2A、H2B、H3、H4各两分子
E.H2A、H2B、H4A、H4B各两分子
16、核酸分子中储存、传递遗传信息的关键部分是(D)
A核苷B戊糖C磷酸D碱基序列
17、游离核苷酸分子中,磷酸基最常位于A
A.核苷酸中戊糖的C-5’上B.核苷酸中戊糖的C-3’上
C.核苷酸中戊糖的C-2’上D.核苷酸中戊糖的C-2’和C-3’上
E.核苷酸中戊糖的C-2’和C-5’上
18、DNA与RNA完全水解后的产物特点是D
A.核糖相同,碱基部分相同B.核糖不同,碱基相同
C.核糖相同,碱基不同D.核糖不同,碱基部分相同
E.以上均不对
19、有关tRNA的二级结构,正确的是E
A.tRNA没有氨基酸臂B.含DHU的是反密码环
C.含TψC的是二氢尿嘧啶环D.可与mRNA密码子识别配对的是额外环
E.tRNA分子中有部分碱基以氢键连接成对
20、有关DNA分子中碱基组成,正确的是A
A.A=T,G=CB.A+T=G+C
C.G=T,A=CD.2A=C+TE.以上均对
21、稀有核苷酸碱基主要是在下列哪类核酸中发现的C
A.rRNAB.mRNA
C.tRNAD.核仁DNAE.线粒体DNA
22、下列哪种情况可使两条互补的单链DNA结合成双链B
A.变性B.退火C.加连接酶
D.加聚合酶E.所列都不是
23、关于真核生物mRNA的结构特点,下列哪项是正确的C
A.其3’-端具有帽子结构
B.由大、小两个亚基组成
C.存在7-甲基鸟苷三磷酸的帽子结构
D.其二级结构与DNA一样,整个分子均为双螺旋结构
E.其5’-端为-CCA顺序
二、填空题
1、核酸完全水解生成的产物有碱基、戊糖、和磷酸。
2、核酸的基本结构单位是核苷酸。
DNA双螺旋的两股链的顺序是___反向平行___关系。
3、B型DNA双螺旋的螺距为__304nm_,每匝螺旋有10_对碱基,每对碱基的转角是_36°__。
(360°有10个碱基)
4、Watsan-Crick提出的双螺旋结构中,__磷酸和戊糖____处于分子外边,___碱基___处于分子中央,螺旋每上升一圈bp数为10对。
5、测知某一DNA样品中,A=0.53mol,C=0.25mol,那么T=0.53mol,G=0.25mol。
6、____mRNA分子指导蛋白质合成,___t__RNA分子用作蛋白质合成中活化氨基酸的载体。
7、DNA变性后,紫外吸收__增加_,粘度_下降__、浮力密度_上升__,生物活性将__丧失_。
8、DNA所在介质的离子强度越低,其熔解过程的温度范围愈_宽_,熔解温度愈_低_,所以
DNA应保存在较__高___浓度的盐溶液中,通常为___1__mol/L的NaCI溶液。
9、DNA样品的均一性愈高,其熔解过程的温度范围愈___小/窄___。
10、mRNA在细胞内的种类多,但只占RNA总量的__5%__,它是以___DNA__为模板合成的,又是_____蛋白质__合成的模板。
11、tRNA的二级结构呈__三叶草_形,三级结构呈__倒L_形,其3'末端有一共同碱基序列CCA-OH其功能是酰化连接氨基酸。
12、DNA在水溶解中热变性之后,如果将溶液迅速冷却,则DNA保持__单链__状态;若使溶液缓慢冷却,则DNA重新形双螺旋结构。
13、核酸的特征元素__P__。
三、名词解释
碱基互补规律(complementarybasepairing)核酸的变性与复性(denaturation、renaturation)
退火(annealing)增色效应(hyperchromiceffect)减色效应(hypochromiceffect)
DNA的熔解温度(meltingtemperatureTm)
环化核苷酸(cyclicnucleotide):
是指核苷酸内部的3'-OH与5'-OH和磷酸集团形成分子内的磷酸酯键而造成的环化分子,主要包括cAMP(3’,5’-环化腺苷酸)和cGMP(3’,5’-环化鸟苷酸),它们的的主要功能是作为细胞的第二信使转导细胞信号。
四、简答题
1、简述tRNA二级结构组成特点及每一组分的功能。
2、如果人体有104个细胞,每个体细胞的DNA量为6.4*109个碱基对。
试计算人体DNA的总长度是多少?
这个长度与太阳—地球之间的距离(2.2*109km)相比如何?
答:
依据DNA分子双螺旋结构特征
简单看看--3、计算下列碱基的浓度:
(以mol/L表示,溶液的PH值为7.0,按260nm处的摩尔消光系数:
鸟嘌呤溶液消光系数为7.2*103;胸腺嘧啶溶液消光系数为7.4*103)
(1)鸟嘌呤溶液的A260=0.325
(2)胸腺嘧啶溶液的A260=0.090
答:
(1)0.325/7200=4.51×10-5mol/L
(2)0.090/7400=1.21×10-5mol/L
4、简述DNA双螺旋结构模式的要点。
5、试述三种主要的RNA的生物功能。
(与蛋白质生物合成的关系)。
第三章维生素与酶学
一、选择题
1、酶的竞争性抑制作用的特点是:
(B)
A.抑制剂与酶的活性中心结构相似
B.抑制剂与酶作用的底物结构相似
C.抑制作用强弱与抑制剂浓度无关
D.抑制作用不受底物浓度的影响
E.动力学曲线中Km值不变,Vmax变小
2、有关同工酶的描述,下列哪一项不正确:
(B)
A.来源可以不同 B.理化性质相同
D.催化反应相同 C.分子量可以不同
3、酶的竞争性抑制的动力学特点是:
(A)
AKm值增大,Vamx不变BKm值与Vamx值均增大
CKm值增大,Vamx减小DKm值减小,Vamx增大
EKm值减小,Vamx不变
4、辅酶与所含的维生素匹配正确的是(C)
AHSCoA-VitB1BNAD-泛酸(遍多酸)
CFAD-VitB2DFMN-Vitpp
5、当底物浓度恰好等于Km时,反应速度v与最大反应速度Vmax的关系是(C)
A相同B不同
Cv=1/2VmaxDv=Vmax
6、抗干眼病维生素是指:
(A)
AVitA BVitK CVitC DVitD
7、肠道细菌可以合成下列那种维生素(D)
A维生素AB维生素C
C维生素DD维生素K
8、维生素D的主要生化作用是(A)
A促进钙、磷的吸收;B促进钙、磷的排泄;
C促进K+、Na+的吸收;D降低血钙、磷的浓度;
9、多食糖类需补充A。
A维生素B1B维生素B2
C维生素B5D维生素B6
10、下列维生素中参与转氨基作用的是( D )
A硫胺素 B尼克酸
C核黄素 D磷酸吡哆醛
12、缺乏后,会导致脚气病的维生素是:
(A)
A维生素B1 B维生素B2
C维生素C D维生素PP
13、酶的催化反应作用主要依赖于(D)
A增加反应物的碰撞频率
B减少反应物的碰撞频率
C增加催化反应的活化能
D降低催化反应的活化能
14、祖国的医学书上曾记载用猪肝治疗“雀目”,猪肝中富含下列哪一种物质(D)
A维生素DB维生素CC维生素B1D维生素A
15、酶促反应速度与下列因素成正比:
C
A温度 BPH值
C酶浓度 D底物浓度
16、含钴的维生素是(B)
A叶酸B维生素B12
C核黄素D维生素A
17、用来治疗坏血病的维生素是:
(C)
A.维生素A B.维生素B族
C.维生素C D.维生素D
18、在米氏方程的双倒数作图中,酶对底物的米氏常数是双倒数直线的(C)
A纵轴截距的倒数B斜率
C横轴截距绝对值的倒数D横轴截距的绝对值
19、转氨酶的辅酶是:
(D)
AFAD BFMN CNAD+ D磷酸吡哆醛
20、多食肉类需补充A?
。
A维生素B1B维生素B2
D维生素B6E维生素B7
21、防止恶性贫血的维生素是:
(E)查看p206上叶酸下B12
A.VitB6 B.VitK C.叶酸
D.VitB12E.VitB12和叶酸
22、关于酶的国际单位的叙述正确的是(C)
A1I.U指在最适条件下,每分钟催化1mol底物转化所需的酶量
B1I.U指在最适条件下,每分钟催化1mol产物生成所需的酶量
C1I.U指在最适条件下,每分钟催化1μmol底物转化所需的酶量
D1I.U指在最适条