无菌室管理制度.docx

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无菌室管理制度

无菌室管理制度

1.无菌检验人员负责无菌室的温湿度记录，温度应控制在18-26℃，相对湿度控制在30-65%。

2.无菌室内，非操作人员一律不得入内。

与试验无关的一切物品不得带入无菌室内。

无菌室内的实验器具必须专用。

3.无菌室内必须保持清洁干燥，每使用一个月必须对无菌室进行洁净度检查；定期用3-5%苯酚或0.1%新洁尔灭溶液等消毒剂擦拭地面。

4.无菌操作前，需将试验物品先放入缓冲间，清洁表面后再带入无菌室，在操作期间不得再将室外物品带入无菌室。

5.进行无菌操作前，应用75%酒精消毒桌面，打开无菌室、超净工作台及缓冲间的紫外灯，以紫外线照射至少1小时，然后打开无菌室和超净工作台的空气过滤器，净化20分钟后再进入。

6.进入无菌室前，双手必须先在0.1%新洁尔灭溶液中浸泡消毒，在缓冲间穿好消毒的无菌室专用工作服、口罩、帽子和拖鞋。

进入无菌室后，操作未完成前不得再出无菌室。

7.无菌室内，不得进行与无菌试验无关的试验。

8.在操作中，若污染了桌面、地面、衣服等，应及时消毒处理。

双手应在消毒液中浸泡后才能离开无菌室。

9.凡沾有活菌材料器皿，用毕后须随时投入5%来苏尔或2%盐酸液中浸泡，或经高压后才能离开无菌室。

10.在进行无菌操作时必须做无菌对照，如发现问题时应及时查明原因，进行处理。

11.操作人员应严格按照无菌操作的规程进行操作。

12.每次进入无菌室的人数不超过3人。

13.操作结束后，应用75%酒精擦洗桌面，双手在消毒液中浸泡

后，用肥皂洗净。

第六节实验室管理制度

一、无菌室管理制度

一、目的

保证无菌室的清洁卫生，确保细菌接种过程中不受外界环境的污染。

二、适用范围

本作业指导书适用于实验室无菌室的操作管理。

三、职责

企管科负责贯彻该作业指导书。

化验员负责该作业指导书的实施。

实验室主任负责本作业指导书的监督捡查。

四、作业要求

1、无菌室每隔半年用醋酸熏蒸一次。

2、无菌室平时应保持整洁，无关杂物严禁放入。

3、进入无菌室前必须更换消毒过的工作服、帽子、口罩及拖鞋，并洗手消毒。

4、无菌室在使用前二小时要先打开紫外灯（紫外灯管要常清洗，用久了，要更换新管）持续一小时，然后关灯经半小时到一小时后方能进入室内工作,各种操作器皿事先放置桌面，再进行操作。

5、确保无菌室的安全卫生，规定每周定时有专人负责检测室内空间含菌量，即在紫外灯关闭后半小时立即以营养琼脂培养皿打开，在空间暴露15min后再盖上，放置35±2℃培养24小时，观察细菌数，如每皿菌落超过15个，则必须立即采取其它灭菌措施（如化学熏蒸或调换新的紫外灯管）以确保操作环境的净化。

6、每次检查都应作好详细记录，以备考查。

7、每次化验结束应及时清理现场，切断电源。

五、相关记录

无菌室灭菌试验记录（BL-LAB-17）

无菌室熏蒸记录（BL-LAB-18）

六：

记录保存：

三年

二、防止病原微生物散布的规定

一、目的

为规范病原微生物管理，特制定本作业指导书。

二、适用范围

适用本实验室所有并原微生物的接种、培养、处理的使用管理。

三、职责

企管科负责该作业指导书的贯彻

药品使用人员负责已领用的培养基和化学试剂的使用管理工作。

实验室主任负责监督检查。

四、一般要求

1、严禁非本室工作人员擅自进入微生物实验室。

2、微生物实验室内物品,未经许不得随便拿出室外。

3、工作人员进入实验室应穿工作衣帽、戴口罩,如沾有可传染物质,应脱下并浸入消毒药水中过夜或高压消毒后再进行洗涤。

4、接种环、接种针用前用后必须置于火焰中烧灼灭菌。

5、含有培养物的试管不可平放桌面,以防止液体流出。

6、实验室内禁止饮食、吸烟和用嘴湿润铅笔和标签等物,手指或其他物品也不得与面部接触。

7、化验操作时应集中思想,以防发生意外,如吸入细菌、划破皮肤及细菌等传染物污染桌面或地面时,应立即处理,必要时及时就医，病原微生物污染的地点,应及时用消毒液喷洒消毒。

8、菌种、血清等应置于冰箱内,并由专人保管,不得带出实验室，领用要登记。

9、工作完毕后应先用药水消除,后用清水洗手。

离开实验室时切断水、电源、锁好大门。

五、相关记录

无

六：

记录保存：

三年

三、培养基和化学试剂使用管理制度

一、目的

为加强培养基和化学试剂使用管理，特制定本作业指导书。

二、适用范围

适用本实验室所有培养基和化学试剂的使用管理。

三、职责

企管科负责该作业指导书的贯彻

药品使用人员负责已领用的培养基和化学试剂的使用管理工作。

实验室主任负责监督检查。

四、要求：

1、各种培养基和化学试剂（包括标准物质,下同）使用前应检查其等级，包装，生产日期及保存情况，必要时进行性能检验。

发现变质或失效，立即停止使用，并报企管科，经批准后，用安全的方法销毁。

2、新购置的培养基在使用前应进行验证试验。

3、试剂橱内不同性质的药品应分开放置，并按照科学分类方法归纳，保持清洁整齐，防止潮湿，避免阳光直射。

4、低沸点易挥发的药品应密封，保存于阴凉处。

5、配制和使用各种试剂，必须注意安全操作,按照规定程序进行，做好防火，防爆，防毒和防止环境污染等措施。

6、所有化学试剂均应有明确清晰的标识。

7、配制好的试剂要放置在适当的容器内,贴好标签，标明名称，浓度，配制日期或有效期等；避光试剂要在棕色瓶或暗处保存。

超过有效期的试剂，不准使用，易变质的试剂要随配随用。

8、标准溶液的配制和标定要有原始记录，经他人复核后方可使用，存放一定时间后，应按规定要求重新标定。

9、瓶装标准试剂和标准溶液取出后，不得返回到原瓶中，以保持其纯度与浓度不变。

10、剧毒品、贵重试剂要妥善存放，双人保管使用，领用剧毒品须经实验室主任批准。

毒害性残液不得乱倒；要经无害化处理方可排放。

五、相关记录

微生物检验培养基（试剂）台帐（BL-LAB-10-2005A）

食品实验室培养基（试剂）配制记录（BL-LAB-11）

标准物质/基准试剂台帐（BL-LAB-16）

六、记录保存：

三年

四、标准菌种复壮传代作业指导书

一、目的

为加强菌种使用管理,防止菌种变异和死亡,特制定本作业指导书。

二、适用范围

适用本实验室所有菌种的复壮,传代的使用管理。

三、职责

企管科负责贯彻该作业指导书

菌种使用人员负责该作业指导书的实施

实验室主任负责该作业指导书的监督检查。

四、作业要点

1、各种标准菌种每隔2个月复壮一次,每隔半个月传代一次。

2、冻干菌种,除弧菌菌种置室温保存,其它菌种均置4℃冷藏保存。

3、半固体保存菌种,需加入灭菌液体石蜡,除弧菌需用胶带将管口密封置室温保存，其它菌种均置4℃冷藏保存。

4、各种标准菌种复壮活化

1① 无菌打开菌种管,按相关标准加入肉汤培养基或用接种针直接挑取管内培养物,接种于肉汤培养基

中，置适当温度培养18-24h（某些特殊菌,需要较长时间）。

②每挑取一环增菌培养液划线接种相关平板置适当温度培养。

③再将培养物接种斜面,置适当温度培养。

5、以斜面培养物进行生化鉴定试验,经验证符合菌种特性后,作传代使用。

五、相关记录

菌种复壮记录（BL-LAB-14-2005A）

复壮后标准菌株领用验收记录（BL-LAB-12）

标准菌株转种保藏使用记录（BL-LAB-13）

六、记录保存：

三年

五、检验管理

一、目的

规范实验室检测工作的程序，确保各项检测工作能及时、准确地完成。

二、适用范围

适用于实验室各项检测工作的管理。

三、职责

实验室主任负责对检测过程实施监督；

化验员负责按规定程序进行各项操作。

四、一般规定和要求

1、检验方法、标准是保证检验质量的重要质量文件。

2、本室承担的检验工作，严格按照操作规程进行，采用的检验方法保证产生有效的、可靠的检验数据，检验准确度达到规定要求。

3、本室有关人员负责收集、整理、保管与检验有关的法规、标准、规程、方法等。

4、本室不允许采用无依据和不符合要求的检验方法，任何不符合规定的检验数据不作为评定、出据报告的依据。

5、检验样品必须具有代表性并符合有关要求，一般分品种，按生产班次抽取。

6、取样工具、样品容器必须经消毒灭菌，不得污染样品。

取样必须遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染，样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。

7、从取样至开始检验的全过程中应采取必要的措施，防止食品中固有的微生物数量和生长能力发生变化。

8、检测人员按规定的方法标准进行检测工作。

在检验中和食品及其稀释液、试剂、培养基接触的一切器皿，必须经过有效的灭菌。

所有检验操作必须严格遵循无菌操作程序，从样品的均质到稀释和接种，相隔时间不应超过20分钟。

9、制备培养基和试剂所用的水，应为蒸馏水，新购的试剂或脱水合成培养基，在使用前应用已知菌作试验，证明无毒，被检菌能正常在其中生长，方可使用。

10、检测环境和所用的试剂、器皿等不得污染试样。

11、检测数据发现异常，必须查找原因。

12、检测工作结束后，按规定提交原始记录和检验报告。

检验报告、原始记录必须复核并经有关负责人审核、签字后及时上报。

13、原始记录格式统一用钢笔填写，不能用铅笔填写，要求字迹工整、清晰，不能涂改。

如有必要更正，可用水平线划掉，填补正确数字或文字。

五、相关记录：

无

六、记录保存：

三年

七、检验结果的质量保证

一、目的

对检验结果的形成过程实施监督，确保检验结果的准确性。

二、适用范围

适用于对实验室各项检测工作所得出的结果的监督管理。

三、职责

实验室主任对检验结果的准确性负总责；

化验员负责按规定程序进行各项操作。

四、一般规定和要求

1、检验结果数值修约按GB8170-1987《数值修约规则》所规定的方法进行。

2、对异常检验结果要进行“四查”（查仪器装置，查样品,查药品试剂，查方法步骤），以确保数据准确。

3、检测数据及检验结果需给2名以上检验人员的自查、复核，检验报告还需负责人签字方可有效。

4、检验人员必须具备相应的资格和经过适当的培训，具备进行相应的测试分析工作能力。

5、检验人员每年进行一次对比试验，以考核及提高化验员的技术水平和工作质量。

（根据平板计数规定，操作者和复核者其差异应在10%之内为合格）。

6、所用培养基或试剂必须在保质期内，按规定的时间、温度、避光、冷藏等方法保存。

培养剂或试剂开封时标明开封时间。

7、试剂的配置严格按标准进行操作，并对培养剂的灭菌效果进行测试检查。

8、有条件的情况下，与检验检疫部门进行对比试验,以提高本实验室检测水平。

9、本实验室对检测人员的工作质量及检验技术水平进行定期不定期的考核检查，使其在仪器检验、方法操作技术、检验结果的准确性制定方面不断提高，确保实验室整体的检测工作质量提高。

五、相关记录

无

六：

记录保存：

三年

八、相关记录及检验标准资料

一、目的

为规范相关记录及检验标准资料的管理,特制定本作业指导书。

二、适用范围

适用本实验室使用管理。

三、职责

企管科负责贯彻该作业指导书

实验室检验人员负责该作业指导书的实施

实验室主任负责该作业指导书的监督检查。

四、作业要点

1、本室对检验工作做好必要的记录，并建立标准档案，妥善保存。

2、本室要求记录必须统一规范，内容完整，字迹清晰，并有记录日期和记录人签名，记录不得随意更改。

如确需更改，可用水平线划掉，填补正确数字或文字。

3、原始记录，检验结果报告等保管期为三年。

4、检验标准资料不断收集整理归档。

五、相关记录

1、无菌室灭菌试验记录（BL-LAB-17）

2、无菌室熏蒸记录（BL-LAB-18）

3、微生物检验培养基（试剂）台帐（BL-LAB-10）

4、食品实验室培养基（试剂）配制记录（BL-LAB-11）

5、标准物质/基准试剂台帐（BL-LAB-16-）

6、菌种复壮记录（BL-LAB-14）

7、复壮后标准菌株领用验收记录（BL-LAB-12）

8、标准菌株转种保藏使用记录（BL-LAB-13）

※无菌及微生物限度检查实验室管理

药检文摘日期:

2004-8-11

无菌及微生物限度检查实验室管理

一、 实验室设施

开展无菌检查及微生物限度检查工作，首先要按照《药品检验所实验室质量管理规范》及《药品生产质量管理规范》的要求，建立一个布局合理、使用方便、操作安全的无菌室，并且配有完善的实验设施和管理制度。

无菌检查、微生物限度检查以及接种室（接种对照菌、菌种传代）均应严格分开，具有危险性的毒株、毒素如破伤风梭菌、黄曲霉毒素的实验室需单独使用，以便控制防止传播。

（一）无菌室

1结构与要求：

无菌室不宜设在底层，防潮、防霉、采光好，远离交通干道，厕所及污染区，面积不超过10m2，高度不超过24m，由两个缓冲间、操作间组成。

操作间缓冲间之间应有样品传递窗，出入操作间和缓冲间的门不应直对。

无菌室内应六面光滑平整，无缝隙，不起灰，不落尘，耐腐蚀，易清洗，墙壁与地面、墙壁与天花板连接处应呈凹弧形，操作间不得安装下水道。

无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，采光面积要大，光照应分布均匀，光照度不低于300勒克斯。

缓冲间和操作间应装有紫外线杀菌灯（2－25w/m3）''用于空气消毒。

紫外线波长200－300nm者具有杀菌作用，其中以265－266nm杀菌作用最强，这与DNA的吸收光谱范围一致，其杀菌机理可能是在细菌细胞DNA中引起胸腺嘧啶双聚体形成，从而干扰细菌细胞DNA复制，导致细菌变异死亡。

紫外线杀菌灯1m以内距离杀菌效果最佳，每次开灯照射时间为30min。

应定期检查紫外线灯辐射强度，不得低于70μW·cm-21m距离。

其缺点是穿透力弱，一张纸板可以阻碍光的透过，不能穿透固体物，故只能用作表面消毒及一些不耐热或化学消毒剂物品的消毒。

2温度、湿度

无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外杀菌灯的杀菌效果，故温度应控制在25±2℃，相对湿度40－60％。

操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于49Pa。

3操作间

无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及调温装置。

洁净度要求：

净化工作台洁净度为100级，无菌室应为10000级。

操作间应准备乙醇灯（或煤气灯），火柴，2％碘酊棉球及75％乙醇棉球、试管架、大小橡皮乳头、砂轮、记号笔、无菌剪刀、镊子、注射器等。

微生物限度检查无菌室操作间内还应有电子称（感觉为01g，最大称量为300g为宜），电动匀浆仪等。

4．缓冲间

缓冲间内应有洗手盆，消毒液，无菌衣，帽，口罩，拖鞋等，缓冲间内不应放置培养箱和其他杂物。

物流缓冲操作台

人流缓冲无菌室

ⅠⅡ操

缓缓无菌室作

冲冲台

操Ⅱ作无菌室缓

台冲

Ⅰ缓冲

（二）洁净级别及检查方法

98年国家药监局颁布药品生产质量管理规范，把药品生产洁净区空气洁净度划分为四个级别：

空气洁净度级别表

─────────────────────────────────────

尘埃数／立方米活微生物数（个）

洁净级别──────────────────────────────

≥05μm≥5μm浮游菌／立方米沉降菌／皿

─────────────────────────────────────

100级≤3500≤0≤5≤1

10000级≤35万≤2000≤100≤3

100000级≤350万≤2万≤500≤10

300000级≤1050万≤6万－≤15

─────────────────────────────────────

洁净级别的检查方法通常采用尘埃数及浮游菌数或沉降菌数测定法。

尘埃数的测定：

用尘埃粒子计数仪测定，取样高度离地面1米，间距05-2米，每个测试点连续采样3－5次，仪器显示测定结果。

浮游菌数的测定，采用浮游菌测定仪。

沉降菌数测定：

方法：

无菌室及净化工作台面消毒擦拭后，打开层流净化装置及净化工作台开关30min，将营养琼脂平板3个及玫瑰红钠琼脂平板3个（直径9cm），置净化工作台左、中、右各1个，开盖暴露30min后将盖盖上，分别放在30－35℃培养箱内培养48h及25－28℃培养箱内培养72h，细菌和真菌平均菌落数小于等于1个为100级。

实验室一旦被污染，洁净度达不到要求，可以清洗或更换净化工作台过滤器，用甲醛或丙二醇、乳酸熏蒸消毒，方法：

在支架上放一个烧杯（内装少许甲醛，8ml／平方米），下面放一个装有少许乙醇的乙醇灯，点燃后，关闭门窗，乙醇用尽后灯自灭，甲醛蒸气充满无菌室，密闭24h。

缺点：

甲醛蒸气易锈蚀仪器，对人有刺激，可用氨水喷雾中和，减少对人眼的刺激。

二、实验室管理制度：

为保证实验工作有序进行，实验室必须制定一系列实验室管理制度。

（一） 实验室要求：

1实验室环境应清洁、卫生、安静，实验室内严禁吸烟和饮食。

2实验人员必须穿戴工作衣帽，工作服经常洗涤、消毒、保持清洁。

3操作前后或离开实验室必须用肥皂或消毒液洗手。

4发生菌液污染台面或地面，应立即用3％甲醛或5％碳酸等消毒液由外向内倾覆其上，1小时后再擦拭，如为破伤风梭菌，则应隔夜后再擦洗。

5工作衣、帽、口罩受到菌液污染时，应立即脱下使污染部位包裹在内部，高压灭菌后再清洗。

6如有传染性培养物污染手部，应先用75％乙醇棉球擦拭，再浸入01新洁尔灭消毒液内泡手，然后再用肥皂及清水彻底洗干净。

7接种环（针），每次使用前后，必须通过火焰灭菌，冷却后方可接种培养物，接种带有蜡质、油质的培养物或菌苔残留多时，不应立即在火焰上灼烧，应先在内焰里将油质培养物烘干后再移至火焰上灭菌，以免活菌外溅污染环境及感染操作者。

8带菌的吸管应浸泡在5％甲酚消毒液内24h后取出清洗，带菌的试管或培养物应在121℃高压灭菌后再取出清洗。

9在接种霉菌、放线菌时应在铺有浸过消毒液的纱布上操作，防止孢子散落传播。

10凡带活菌的物品，必须消毒后才能清洗，严禁污染下水道。

（二） 无菌操作要求：

无菌操作是指在无菌的环境条件下，使用无菌器材，防止微生物污染的操作技术。

即保持待检样品在操作时不被污染，又要防止被检的微生物及阳性对照菌在操作中污染环境或感染操作人员。

从事无菌及微生物操作的工作人员必须经过无菌技术及基础微生物学专业知识的学习及培训才具备上岗操作的资格，微生物专业检验人员也不应该频繁地变换工作岗位。

1无菌室应每次使用前后用01新洁尔灭消毒液或2％甲醛液擦拭工作台面及可能污染的死角，湿拖地面，打开无菌空气过滤器及超净工作台的开关30分钟，紫外线杀菌灯照射1小时。

2操作人员用肥皂洗手后进入缓冲间换拖鞋，用75％乙醇棉球擦手，穿戴工作衣帽、口罩。

将所需物品剥去牛皮纸及外包装，从传递窗移入操作间，再用01新洁尔灭泡手后进入操作间，在乙醇（或煤气灯）火焰区（火焰高度3－5cm）操作。

3供试品表面消毒，如为安瓿先用砂轮划痕后用2％碘酒棉球擦拭，再用75％乙醇棉球擦拭、待干，也可以用消毒液浸泡消毒。

4操作者勿用嘴直接吸吹吸管，防止致病菌感染操作人员及口中的杂菌污染供试品。

5在无菌操作中切勿大幅度或快速动作、拖行，以免搅动空气中尘埃微粒。

6注射器如需回抽时，应对着火焰吸入无菌空气。

7所用的器材如培养基、稀释剂配制后经湿热灭菌121℃20分钟，吸管培养皿等均应洗涤，干燥，包扎后经干热灭菌160℃2小时才能使用。

（三）仪器设备

实验室所用的各种仪器，如培养箱、电热恒温水浴瓶、电热恒温干燥箱等，均应严格按照仪器说明书操作，均应按计量要求定期检测，并做好检测与维修记录，以保证其正常使用。

无菌操作净化工作台要定期检测洁净度，应达到百级。

净化工作台的高效过滤器应根据使用情况（如使用年限太久，吹出的风太弱，无菌室被污染），可以取下来清洗，必要时以更换处理。

高压蒸汽灭菌器除定期检验表压或温度外，使用时要进行灭菌效果检查。

（四）培养基的管理

培养基是人工配制的适合细菌生长繁殖的生物营养物质，培养基的管理在无菌及微生物限度检查工作中起着重要的作用。

1培养基购入后应记录名称、产地、批号，培养基配制记录应包括：

名称、配制量、配制者、配制日期。

2干燥培养基的配制应先量入蒸馏水至容器中，再称取培养基干粉放入水中，摇匀，静置15分钟使其溶解，一般不要加热，避免某些营养成分被破坏。

3培养基配制后应立即灭菌，以防长菌使营养成分损耗，高压灭菌时应防止温度过高、时间过长，使营养成分破坏致使实验结果出现假阴性。

灭菌时间：

稀释剂121℃灭菌20分钟，含糖培养基115℃灭菌20分钟。

4配制好的培养基应保存在凉暗处（2－10℃）或置4℃冰箱内保存，一月左右使用。

保存时间需视培养基中水分蒸发程度及有无污染而定，用硅胶塞，封入塑料袋，内可延长保存时间。

培养基切勿反复加热使用。

5培养基的质量控制，应选用优质的蛋白胨，牛肉膏等营养成分，化学纯以上的化学试剂，调配成最适的pH值。

配制后应按规定做无菌试验，如无菌检查用的培养基，需气菌、厌气菌培养基置30－35℃培养48小时，真菌培养基置20－25℃培养72小时，应无菌生长。

除此以外，还需做培养基性能的质量控制，性能试验：

即不同的培养基接种不同的已知标准菌株，培养24小时后，观察细菌生长情况，如无菌检查培养基需做培养基灵敏度试验，细菌生长良好，说明培养基性能可靠。

（四）实验菌种的保藏与管理

国内药品微生物检验所用的菌种菌号是CMCCB、CMCCF，B（Bacteria）代表细菌，FFungi代表真菌。

由中国药品生物制品检定所提供。

1菌种保藏基本要求

菌种的保藏是微生物学基础工作中的一项重要内容，用人工方法低温、干燥、缺氧、缺营养等方法控制微生物的代谢，使细胞基本上处于休眠状态，繁殖受到抑制仍保持菌种原有的各种生物学特性，以达到保种的目的。

菌种保藏的关键是不变异、不污染、不死亡。

菌种保藏分四个阶段：

①挑选特征典型的纯菌菌落，其方法是用接种环挑取少许菌苔，接种至2ml营养肉汤或09氯化钠溶液中制成菌液，再取一环菌液在营养琼脂平板上分区划线，培养后可见单个菌落生长。

②凡能产生孢子或芽胞的微生物都用孢子和芽孢进行保种

孢子和芽胞的代谢作用较弱，但对恶劣环境有很强的抵抗力，能保存微生物的全部生命活性，是某些微生物在不利环境条件下，自我保护而形成的一种特有功能，在适宜的条件下，芽胞可发芽成为繁殖体。

如生孢梭菌（64941），在传代前，将菌液管放入80℃水浴中作用30分钟，杀死杂菌繁殖体后用芽孢传代。

③定期对保藏菌种进行检查、分离、纯化，以防菌种变异及衰退，检查项目：

菌落形态、染色、镜检、生化特性及血清学检查。

④选择适宜的培养基及方法

2常用菌种的保藏方法

①普通琼脂斜面：

用于常用细菌的传代。

在营养琼脂培养基内按05加入琼脂粉配制而成。

接种培养后，将菌种管用硅胶塞塞紧，置4℃冰箱保存，每隔2－3个月传种一次。

铜绿假单孢菌在冰箱中易发生菌体自溶而死亡，菌种可放25℃培养箱内保存。

②半固体琼脂：

用于常用细菌的传代。

在营养肉汤培养基内按05加入琼脂粉配制而成。

穿刺接种培养后，置4℃冰箱保存，6个月传种一次。

如在培养管内加少量无菌液体石蜡隔绝空气，减少水分蒸发，可延长菌种保藏期。

③真菌琼脂斜面：

用于真菌的传代。

在真菌培养基内按13加入琼脂粉配制而成。

划线接种后，20－25℃培养24小时，置4℃冰箱保存，3－6个月传种一次。

④沙氏琼脂斜面：

用于真菌的传代。

配方：

蛋白胨10g，葡萄糖10g，琼脂粉13g，水1000ml，待上述成分溶化后，摇匀分装，115℃灭菌20分钟，趁热摆成斜面。

培养、保存及传代同③。

⑤40％甘油水：

用于细菌的传代。

配制方法：

甘油40ml加水至100ml即成。

分装至试管