天参益智胶囊中四味药材的薄层色谱辨别及淫羊藿苷的含量测定.docx

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天参益智胶囊中四味药材的薄层色谱辨别及淫羊藿苷的含量测定

天参益智胶囊中四味药材的薄层色谱辨别及淫羊藿苷的含量测定

朱洁，肖海涛，郝小燕罗俊，官志忠

【关键词】天参益智胶囊质量标准薄层辨别淫羊藿苷高效液相色谱法

　　Abstract：

ObjectiveToestablishthequalitystandardforTianshenyizhiCapsule.MethodsHerbaEpimedii,RadixAngelicaeSinensis,RhizomaAcoriTatarinowii,RadixPolygoniMultifloricumSuccoGlycinesSotaeinTianshenyizhiCapsulewereidentifiedbyTLC,andthecontentoficariinwasdeterminedbyHPLC.ResultsTheidentificationmethodwashighlyexclusive.Icariinshowedagoodlinearrelationshipintherangeof～μg,andr=98.Theaveragerecoverywas%,RSD=%（n=9）.ConclusionThemethodisaccurateandsimplewithgoodreproducibility,anditcancontrolthequalityofthispreparationeffectively.

　　Keywords：

TianshenyizhiCapsule;QualityStandard;TLC;Icariin;HPLC

　　天参益智胶囊是在大量传统体会验方的基础上，研发的一种医治老年性痴呆疾病的中药制剂。

通过初步药效学研究说明［1，2］，该复方对痴呆大鼠学习经历能力有明显的改善作用，对胆碱能功能消退有较好的爱惜和医治作用，可显著降低老年痴呆大鼠海马和皮质中兴奋性谷氨酸含量，拮抗谷氨酸介导的神经毒性作用，延缓衰老和防治老年痴呆。

为研究该产品的质量标准，咱们对制剂中的淫羊藿、当归、石菖蒲、何首乌4味药材的薄层辨别方式进行了研究，并以其中的淫羊藿苷作为指标性成份进行了含量测定。

　　1仪器与试药

　　仪器

　　HP1100高效液相色谱仪（包括HP1100泵，HP1100紫外检测器，HP1100柱温箱，HP1100/WND-3D工作站），QY-20三用紫外分析仪（上海市闻天仪器设备），KQ-250B型超声波提取器（昆山市超声仪器）。

　　试剂与药品

　　D-101型大孔吸附树脂（天津农药股分树脂分公司），硅胶（青岛美晶化工），氧化铝（200～300目，上海新诚精细化工），淫羊藿苷对照品、当归对照药材、石菖蒲对照药材、何首乌对照药材（由中国药品生物制品检定所提供，批号别离为，，，）。

乙腈为色谱纯，水为超纯水和蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

天参益智胶囊（自制g/粒，批号：

1，2，3）。

　　2方式与结果

　　薄层辨别

　　淫羊藿的辨别

　　取胶囊内容物3g，加95%乙醇30ml，超声30min，滤过，滤液水浴挥干，残渣加1ml乙醇溶解，作为供试品溶液。

取缺淫羊藿阴性样品3g和淫羊藿药材1g，同法制备缺淫羊藿阴性样品溶液和淫羊藿药材对照溶液。

取淫羊藿苷对照品用甲醇制成1mg·ml-1的对照品溶液。

别离吸取供试品溶液和缺淫羊藿阴性样品溶液各10μl，淫羊藿药材对照溶液和淫羊藿苷对照品溶液各5μl，别离点于同一硅胶H板上，以氯仿-甲醇-甲酸（15∶1∶）为展开剂，展开2次，掏出晾干。

喷以5%三氯化铁乙醇液，晾干。

供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。

结果见图1。

　　当归的辨别

　　取胶囊内容物3g，置于100ml的烧杯中，加入水60ml煎煮1h，滤过，滤液水浴挥至适量，用石油醚萃取3次，20ml/次，归并萃取液，水浴挥干，残渣加入醋酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液。

另取当归药材1g，同法制成药材对照溶液。

取缺当归阴性样品3g一样品法制备缺当归阴性样品溶液。

参照薄层色谱法［3］实验，吸取供试液和阴性样品溶液各10μl，当归药材对照溶液5μl，别离点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶板GF254上,用正己烷-醋酸乙酯（10∶1）为展开剂，展开，掏出晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，样品与药材色谱相应的位置处显相同荧光的斑点，阴性样品无干扰。

结果见图2。

　　石菖蒲的辨别

　　取胶囊内容物3g，置于100ml的烧杯中，加入水60ml煎煮1h，滤过，滤液水浴挥至适量，用石油醚萃取3次，20ml/次，归并萃取液，水浴挥干，残渣加入醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取石菖蒲对照药材g，同法制成药材对照溶液。

取缺石菖蒲阴性样品3g，一样品法制备缺石菖蒲阴性样品溶液。

参照薄层色谱法［3］实验，吸取供试液和阴性样品溶液各10μl，石菖蒲药材对照溶液5μl，别离点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，用石油醚-醋酸乙酯（8∶1）为展开剂，展开，掏出晾干，喷以10%的磷钼酸乙醇溶液，于105℃烘烤至斑点清楚。

样品与药材色谱相应的位置处显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。

结果见图3。

　　何首乌的辨别

　　取胶囊内容物3g，置于100ml烧杯中，加入蒸馏水50ml煎煮30min，滤过，滤液浓缩至适量，用氯仿萃取3次，30ml/次，归并萃取液，水浴挥干，残渣加入甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。

另取何首乌对照药材g，同法制成药材对照溶液。

取缺何首乌阴性样品3g一样品法制备缺何首乌阴性样品溶液。

参照薄层色谱法［3］实验，吸取供试液和阴性样品液各10μl，药材对照溶液3μl，别离点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的高效硅胶G板上，以氯仿-丙酮（7:

1）为展开剂，饱和15min，展开约cm左右，掏出晾干，再以环己烷-醋酸乙酯（10:

为展开剂,饱和15min，展开，掏出晾干,置氨蒸气中熏至斑点清楚。

样品与药材色谱相应的位置处显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。

结果见图4。

　　淫羊藿苷的含量测定

　　色谱条件［3］

　　色谱柱为DiamonsilTMC18（5μm，250mm×mm）；流动相为乙腈-水（30∶70）；流速1ml·min-1；进样量10μl；波长270nm；柱温40℃。

　　供试品溶液的制备

　　取天参益智胶囊内容物g，周密称定，置具塞锥形瓶中，加稀乙醇25ml，周密称定，超声1h，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

　　对照品溶液的制备

　　周密称取淫羊藿苷对照品mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，为对照品贮备液，浓度为402μg·ml-1。

　　阴性对照溶液的制备

　　取缺淫羊藿阴性样品粉末约g，周密称定，按上述供试品溶液的制备方式，制备阴性对照溶液。

　　系统适用性实验

　　别离吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液，按前述色谱条件测定。

结果说明，在本实验条件下，淫羊藿苷与其他组分峰分离度大于，阴性对照无干扰，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算不低于1500。

结果见图5。

　　线性关系考察

　　别离周密吸取对照品储蓄液2，4，6，8，10ml置于25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，备用；按上述色谱条件测定各浓度溶液的峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，淫羊藿苷在～μg线性关系良好。

回归方程为Y=7，r=98。

　　周密度实验

　　周密吸取同一对照品溶液10μl，按前述色谱条件重复进样6次，测得淫羊藿苷峰面积积分值的RSD为%，说明测定仪器周密度良好。

　　重复性实验

　　取同一批样品，按“供试品溶液的制备”方式，平行制备供试品溶液6份，按前述色谱条件测定，测定淫羊藿苷含量，峰面积RSD为%，说明测定方式重复性良好。

　　稳固性实验

　　取同一批样品制成的供试品溶液10μl，别离在0，2，4，8，12，24h各进样1次，测得淫羊藿苷在24h内峰面积的RSD为%，说明供试品溶液在24h内稳固性良好。

　　回收率实验

　　取已知含量的样品约g，共9份，周密称定，别离加入不同量的淫羊藿苷对照品，按“方式制备，测得淫羊藿苷的平均回收率为%，RSD为%（n=9），说明测定方式准确靠得住。

结果见表1。

表1回收率实验结果（略）

　　样品含量测定

　　取3批样品，按“方式制备样品溶液，别离周密吸取所得供试品溶液10μl，注入液相色谱仪测定。

结果见表2。

表2样品测定结果（略）

　　3讨论

　　淫羊藿的薄层辨别中《中国药典》（2005年版Ⅰ部）采纳以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶1∶1∶1）为展开剂，三氯化铝作为显色剂，实验中显色成效欠佳，改用以氯仿-甲醇-甲酸（15∶1∶）为展开剂，以三氯化铁显色，分离成效好，斑点显色清楚。

　　《中国药典》（2005年版Ⅰ部）中采纳挥发油对石菖蒲进行定性辨别，而该制剂的制备工艺中石菖蒲为直接水煎煮，因此咱们对石菖蒲的定性辨别方式进行改良，其结果所成立的方式显色成效明显，成点性好。

　　在当归定性辨别中，按《中国药典》（2005年版Ⅰ部）用乙醚超声处置，斑点多、干扰大，改用石油醚超声后，以正己烷-醋酸乙酯（10∶1）为展开剂，成效较好。

　　何首乌的定性辨别中，按《中国药典》（2005年版Ⅰ部）中以苯-乙醇（2∶1）为展开剂，斑点不明显，且苯毒性大，故将展开剂改成氯仿-丙酮（7∶1），饱和15min,展开约cm左右，掏出晾干，再以环己烷-醋酸乙酯（10∶）为展开剂，饱和15min，二次展开，掏出晾干，置氨蒸气中熏至斑点清楚，成效较好。

　　淫羊藿为本品的君药，所含的黄酮具有较好的脑神经爱惜作用［4］，淫羊藿苷为淫羊藿中要紧成份，故将淫羊藿苷作为指标性成份进行了含量测定，所成立的测定方式具有准确、简便、快速、重复性好等特点，有利于本品的质量操纵。

【参考文献】

　　［1］罗喜荣，李红艳，郝小燕，等.天参益智方对老年性痴呆模型大鼠中枢神经递质的阻碍［J］.中药药理与临床，2007,23

（1）:

65.

　　［2］罗喜荣，李红艳，郝小燕，等.天参益智方对老年痴呆模型学习经历能力及Ab1-40的阻碍［J］.时珍国医国药,2007,18（5）:

1049.

　　［3］国家药典委员会，中国药典，Ⅰ部［S］.北京：

化学工业出版社，2005：

229，附录VIB.

　　［4］芮菁.中药医治老年痴呆的研究状况［J］.天津药物，2003，15

（1）：

57.